Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2007 №9

Tом I

Едва начав интересоваться разведением грибов, я взял в библиотеке известную книгу о грибоводстве и с воодушевлением прочел ее. Мой интерес, однако, вскоре обернулся полным разочарованием, когда я узнал о методиках и оборудовании, которые, как утверждалось, были совершенно необходимы для выращивания грибов без риска заражения культуры. Мне потребовалась бы стерильная лаборатория с ламинарным боксом, снабженным электростатическим и ХЕПА-фильтрами, а также ультрафиолетовой лампой. Лаборатория должна была быть снабжена стерильным тамбуром, в котором я мыл бы ноги, а для входа в саму лабораторию я бы переодевался в специальную одежду. Пол в лаборатории следовало бы мыть каждый день с хлорной известью. Комнаты с растущими грибами должны были бы быть совершенно отделены от лаборатории, чтобы в стерильную зону не попали споры. А сами плодоносящие культуры должны были бы находиться в специально разработанных пластиковых пакетах с встроенными микропористыми фильтрами, чтобы грибной мицелий мог дышать, но при этом на него из окружающей среды не попадали бы споры плесени и бактерии. Разумеется, мне бы потребовался автоклав или, по крайней мере, скороварка особого дизайна, чтобы стерилизовать субстрат перед заполнением пакетов.

После краткого рассмотрения таких требований к процессу я оставил всякую мысль о выращивании грибов. Я не собирался приобретать все это оборудование и, вообще говоря, не имел склонности к такого вида деятельности… Я сделал из прочитанного единственный вывод: мой дом — это гиблое место для грибных культур. Ни я сам, ни моя жена не являем собой идеал домашних хозяев. У нас в доме бывает беспорядок, даже можно найти нетронутую пыль. В холодильнике (или вне холодильника) могут встретиться продукты, покрытые зеленой или белой плесенью. Не смотря на то, что я обладаю опытом стерильной работы (еще со времени студенчества на биохимическом факультете), я не думаю, что это могло спасли меня от легионов зловещих контаминантов[59], которые только и ждали, чтобы при первой же возможности свести на «нет» очередную попытку грибного культивирования.

Тем не менее, мысль о выращивании грибов не канула в лету. Напротив, где-то через год я вернулся к этому вопросу со свежей идеей. Мне повстречалась заметка о том, что питательная среда, используемая для проращивания семян орхидей, могла быть очищена от заражений, если к ней добавляли перекись водорода. В то время как перекись убивала бактерии, дрожжевые грибки и грибные споры, семена орхидей оставались нетронутыми, потому что они содержат в достаточных количествах ферменты, разрушающие перекись водорода. Таким образом, семена орхидей могли быть без труда проращены и сохранены даже начинающими, относительно неопытными растениеводами без использования строгих стерильных техник.

В общем, возник такой вопрос: а не может ли добавление перекиси в питательную среду для грибов послужить сохранению среды от заражения, как это происходит с семенами орхидей? Если бы это было так, то, возможно, выращивание грибов стало бы доступным для начинающих, как и в случае с проращиванием семян орхидей. Так я решил опробовать эту методику с грибным мицелием.

За сим последовал достаточно сложный и не прямолинейный процесс накопления знаний о разведении различных грибов, эксперименты с добавлением перекиси, попытки использовать различные концентрации, изучение различных субстратов применительно к разным видам грибов и выяснение их совместимости с перекисью, подбор правильных параметров пастеризации и стерилизации, возвраты на несколько шагов назад для того, чтобы настроить лучшим образом pH, эксперименты с добавками, отслеживание источников заражений, шлифовка самой процедуры культивирования и так далее… В конечном счете, я разработал некоторое достаточно надежное описание того, что я делал. Весь процесс занял гораздо больше времени, чем я мог подумать. Но в результате стало ясным, что процесс культивирования грибов в самом деле может быть доступным для начинающих без использования стерильного оборудования, фильтрации воздуха и даже без использования скороварки, если грибовод применяет перекись для защиты субстрата от заражений. При использовании разработанных мною методик, даже относительно неопытный грибовод может осуществить все стадии роста различных грибных культур без сомнительного вложения средств в оборудование и прочее хозяйство.

Я написал эту книгу как руководство для домашнего грибоводства — книгу, которая могла бы послужить отдельным самодостаточным букварем по домашнему культивированию некоторых замечательных видов грибов и которую мог бы использовать любой грибовод, даже начинающий. Мое предыдущее руководство, «Выращивание грибов с перекисью водорода», было написано для грибоводов, уже знакомых с традиционными методами культивирования, и основной упор в ней был сделан на использование перекиси для улучшения традиционных методов. В то время как предыдущая книга сделала возможным, для начала, осуществить все фазы культивирования деликатесных грибов в домашних условиях, без использования стерильного оборудования и фильтрации воздуха, данное руководство идет еще дальше и предлагает методики, которые не требуют стерилизации под давлением.

Конечно, не все методики, приведенные в этой книге, придуманы мной. Отдельные методики, которые сами по себе не требуют использования перекисных техник, или для осуществления которых использование перекиси не обязательно, возможно, были разработаны кем-то еще.

Для всестороннего ознакомления с традиционными методами культивирования грибов, равно как и с требованиями к росту для разнообразных видов, пожалуйста обратитесь к книге Стэйметса "Growing Gourmet and Medicinal Mushrooms", книге Чилтона и Стэйметса "The Mushroom Cultivator" или какой-нибудь другой классике грибоводства. Эти книги являются ценными справочниками для каждого, кто желает серьезно заняться разведением грибов и постичь этот процесс в деталях. Кроме того, даже беглого прочтения в этих книгах глав о необходимости тщательного соблюдения стерильности и об источниках заражений будет достаточно для того, чтобы понять, насколько мои методики упрощают весь процесс.

Замечу, что стерильные или асептические методики, которые в некоторой мере необходимы даже при использовании перекись, всегда легче показать, чем описать. Надеюсь, что читатель сможет найти необходимую для этого информацию. Можно, например, обратиться за помощью в местную организацию по грибоводству.

Также замечу, что данная книга не задумывалась как пособие для коммерческого разведения грибов, хотя методы, описанные здесь, могут в той же степени, что и для домашнего культивирования, оказаться полезными для небольшой грибоводческой фермы.

Практически все грибы, культивируемые в настоящее время, могут быть выращены в домашних условиях. Тем не менее, некоторые виды поддаются культивированию проще, чем другие, а некоторые, хоть и не столь притязательны к условиям выращивания, вознаграждают грибовода в меньшей степени, чем их более капризные собратья.

В настоящее время я выращиваю у себя дома четыре разновидности грибов. Вот они:

Hypsizygus ulmarius, ильмовый устричный гриб, или ильмовый гриб: хотя и не является членом семейства устричных, выглядит и ведет себя как устричный гриб. Он растет агрессивно на опилках или соломе, редко подвергается заражениям при использовании техник, представленных в этой книге, и хорошо себя чувствует в различных условиях и при разных температурах, производя плодовые тела в вертикальном или горизонтальном положении. В благоприятных условиях дает большие и привлекательные грибы, которые похожи скорее на необыкновенные белые цветы. Обладает наилучшими вкусовыми качествами среди устричных грибов (не считая P. eryngii).

Pleurotus eryngii, или королевский устричный гриб: представитель семейства устричных грибов, но не обладает характерными для них видом и поведением. Будучи родом из Европы, он произрастает из земли в величественной позе, обходя своим вниманием деревья и упавшие стволы. Этот гриб отличается большими, мясистыми плодовыми телами. Требования к субстрату более строгие, чем для других устричных грибов, равно как и требования к температуре. Я читал, что этот гриб предпочитает опилки в противовес соломе, но сам я недостаточно много экспериментировал с этим грибом на соломе, чтобы подтвердить или опровергнуть это утверждение. Плодоношение лучше всего происходит при весенней или осенней температуре. Гриб сильно замедляет свой рост в зимнее время и увядает в период летней жары. При правильном приготовлении этот гриб является одним из самых вкусных среди культивируемых грибов. Особенность приготовления состоит в том, чтобы при жарении на сковороде не дать грибу стушиться в собственном соку, а затем немного его посолить.

Hericium erinaceus, или львиная грива, гериций, также называемый грибом Пом-Пом: гриб без ножки и шляпки, присущих обычным грибам, поступающим в продажу. Выглядит как снежок, покрытый белыми сосульками. Растет быстро на опилочных субстратах, плодоносит без проблем при различных температурах. Я слышал, что этот гриб может быть выращен и на соломе, но я ни разу не пробовал. Повара любят этот гриб, и он действительно обладает замечательным ароматом, иногда напоминая по вкусу мясо креветок.

Agaricus subrufescens, или миндальный гриб: является представителем семейства, включающего в себя известные шампиньон и портабелло. Его отличает незабываемый аромат миндального экстракта. Подобно шампиньону, он предпочитает расти на компосте, но может быть выращен на соломе, щепках или обогащенных опилках. Этот гриб является теплолюбивым, но он также способен плодоносить в зимнее время в обогреваемом помещении, что позволяет отнести его к достойным кандидатам для круглогодичного выращивания. Этот гриб требует нанесения покровного слоя, т. е. слоя рыхлой землеподобной смеси, которая обычно содержит торф. Этот слой наносится на поверхность субстрата и служит для формирования плодовых тел.

Другие виды, заслуживающие внимания:

Lentinula edodes, или шиитаке: один из наиболее популярных, культивируемый многими грибоводами, хорошо и подробно описан. Я не выращиваю шиитаке, но методы по работе с грибной культурой, посевным мицелием и приготовлению субстрата, описанные здесь, подойдут для выращивания шиитаке в той же степени, что и для других грибов, которыми я обычно занимаюсь. Обратите внимание на то, чтобы штамм шиитаке, выбранный вами, подходил для выращивания на опилках, если вы решите использовать в качестве основного субстрата опилочные гранулы. Доступные штаммы различаются на теплолюбивые и холодолюбивые.

Pleurotus ostreatus, вешенка и другие виды устричного гриба: подобно Н. ulmarius, относятся к наиболее легко культивируемым грибам, растущим на опилках, соломе или на других разнообразных субстратах. Этот вид был первым, на котором я добился плодоношения, используя перекисный метод. Имеющиеся штаммы предназначены практически для любого температурного диапазона. Споры гриба P. ostreatus, которые распространяются из зрелых грибов в огромных количествах, могут вызвать проблемы со здоровьем.

Ganoderma lucidum, или рейши, лакированный трутовик: важнейший медицинский гриб с иммуномодулирующими свойствами. Этот гриб растет на опилках твердых пород в теплых условиях. Родственный вид, с северо-западного тихоокеанского побережья, Ganoderma oregonence, предпочитает более низкие температуры. Эти грибы с древоподобной структурой ломают на кусочки и заваривают как чай.

Coprinus comatus, или лохматая грива, навозник белый: короткоживущий гриб с нежным вкусом, который лучше всего растет на компосте. Мне ни разу не удавалось достичь его плодоношения в помещении, но после того, как я выбросил субстрат у себя в саду, эти грибы появлялись там в течение пары сезонов.

Hypsizygus tessulatus, или шимеи, опенок зимний: симпатичный, небольшой круглый гриб с хрустящей мякотью, растет на соломенном или опилочном субстрате. Штамм, который я приобрел, требовал для инициализации плодоношения низкой температуры, граничащей с замерзанием, поэтому я не слишком много экспериментировал с этим грибом. Вероятно, существуют штаммы, не столь требовательные к температурным условиям.

Strofaria rugoso-annulata, или королевская строфария: большой гриб, который растет на грядах из древесной щепы или соломы и требует для плодоношения покровного грунта и теплой погоды. Мицелий растет медленно и в настоящее время известен всего один штамм, который плодоносит в помещении, вне зависимости от времени года.

Agaricus bisporus/brunnescens, или шампиньон, также известный как коричневый шампиньон, кримини и портабелло: в США на больших коммерческих фермах выращивают так много шампиньонов и продают их по такой низкой цене, что эти компании даже не могут извлечь выгоду из своего бизнеса.

Подобно миндальному грибу, предпочтительным субстратом для шампиньонов и портабелло является компост. Приготовление качественного компоста является сложным и трудоемким процессом, описание которого выходит за рамки данной книги. Тем не менее, шампиньоны тоже можно выращивать на соломе, приготовленной с использованием перекисного метода. Урожай в этом случае будет ниже, чем на компосте, но солома настолько проста в приготовлении в домашних условиях, что это поможет без труда восполнить более низкую урожайность.

Методики, описанные в данном руководстве, требуют очень незначительных затрат на оборудование для выращивания собственных грибов в домашних условиях. Для работы с перекисью и измерения объемов раствора потребуются только мерная пипетка (10 мл) и градуированный цилиндр (на 100 или 250 мл). Их можно приобрести у поставщиков лабораторного оборудования. Для измерения концентрации перекиси, приобретаемой в аптеке, вам понадобится небольшая пробирка с отогнутой кромкой на горлышке и воздушный шарик. Для приготовления посевного мицелия потребуются банки с крышками (полулитровые, 800-граммовые или литровые), большая кастрюля с крышкой для обработки банок паром, небольшие весы и некоторое количество пластиковых пищевых пакетов. Работа с агаровыми культурами потребует приобретения набора чашек петри. Я рекомендую пластиковые чашки многократного использования, если вам удастся найти такие. Я приобрел чашки в местной фирме, торгующей лабораторным оборудованием. Скороварка, хоть и не требуется в обязательном порядке, будет полезной. Подержанную скороварку можно найти на распродажах или в комиссионных магазинах; новую — в хозяйственных отделах, торгующих кухонными принадлежностями. Обязательно проверьте, чтобы найденная вами скороварка была достаточно высокой для помещения в нее банок. Вам НЕ потребуются: главбокс, ХЕПА-фильтры, ультрафиолетовые лампы, стерильные лаборатории, ламинарные боксы, атмосферные тамбуры, дезинфекция обуви и так далее и тому подобное…

Подготовка и работа с основным субстратом на основе гранулированных опилок потребует наличия кастрюли с крышкой — для кипятка и охлаждающей воды, второй кастрюли или чайника, чтобы кипятить воду для пастеризации контейнеров и контейнера размером побольше, например пластмассового ведра на 18 л с плотно закрывающейся крышкой. 18-ти литровые ведра часто выбрасывают или продают по низкой цене на хладокомбинатах, производящих мороженое или на других производствах пищевой продукции. Избегайте использования ведер, которые до этого были использованы под краску, растворители или другие токсичные вещества.

Для инкубации основного субстрата вам также понадобятся несколько небольших коробок (объемом около 8 л, или размером примерно 20x20x20 см) и несколько новых длинных кухонных пакетов (пленка толщиной 50 микрон или меньше; избегайте использования мягких пакетов из более толстой пленки) или набор из пластиковых ведерок на 7-10 л с крышками. Для ухода за плодоносящими грибами вам понадобится ручной распылитель-увлажнитель и прохладное место. Позже, если вы решите выращивать грибы в больших количествах, вам может потребоваться вентилятор и автоматическая система увлажнения воздуха.

Для приготовления агаровой среды вам потребуется агар, солод мелкого помола и, среди прочего, хлопья дрожжевого экстракта (если вы планируете использовать для стерилизации среды скороварку). Агар можно приобрести в магазинах здорового питания, в фирмах, занимающихся снабжением научных лабораторий или у поставщиков принадлежностей для коммерческого грибоводства. Замечу, что не смотря на более высокую стоимость агара по сравнению с готовой мальт — дрожжевой агаровой смесью, последняя содержит только 50 % (или меньше) агара по весу, поэтому этот вариант не обязательно будет лучшим. Молотый солод можно найти в магазинах, связанных с пивоварением или у поставщиков для лабораторий. Дрожжевые хлопья могут продаваться в магазинах здорового питания.

Для получения посевного и основного субстратов вам могут понадобиться бумажные и опилочные прессованные гранулы. Гранулы из прессованной бумаги продаются в моей местности под названием Crown ТМ Animal Beddings и Good Mews Cat Litter (названия подстилки для животных и подсыпки для кошек). Подобные материалы можно найти в хозяйственных магазинах для животных. В сельской местности США и Канады прессованные гранулированные опилки можно встретить в хозяйственных магазинах, магазинах для фермеров, магазинах, торгующих печами, работающими на гранулированных опилках и т. д. В городских районах поищите телефоны компаний, занимающихся продажей печей, работающих на прессованных опилках или свяжитесь со своими знакомыми, живущими в сельской местности. Возможно, для приобретения гранулированных опилок вам придется предпринять поездку за город. Постарайтесь выяснить, из какой древесины изготовлены гранулы, отдавая предпочтение опилкам из твердых пород — такие опилки подойдут для большинства грибов (тем не менее, еловые опилки хорошо подходят для видов P. eryngii и A. subrufescens).

Что перекись может обеспечить

Перекисный радикал — это химически активная форма кислорода, которая разрушает различные органические соединения. В живых клетках перекись поражает генетический материал, клеточные мембраны и все остальное, с чем он может реагировать. В этой связи, перекись в эффективной концентрации может убивать бактерии, бактериальные эндоспоры, грибки и грибковые споры, включая споры высших грибов. Перекись, без сомнения, способна уничтожать микроорганизмы, привнесенные из воздуха, а также источники заражения, связанные с кожными покровами человека (считается, что чешуйки кожи постоянно падают с грибовода в окружающее пространство). Перекись водорода, таким образом, в известной степени действует против всех воздушных источников заражения, включая споры самих грибов. Отмечу для контраста, что антибиотики действуют в основном против бактериального заражения, а фунгициды — только против грибков и плесеней.

Прелесть перекиси состоит в том, что он не убивает развитый мицелий и не мешает его росту и плодоношению. Несмотря на широкий спектр действия перекиси против известных источников заражения грибной культуры, существует достаточно широкий диапазон ее концентраций, при которых перекись не будет препятствовать росту и плодоношению грибов. Развитый мицелий, благодаря своей способности производить в больших количествах ферменты[60], разрушающие перекись, способен защитить себя от гораздо больших концентраций перекиси, чем изолированные споры, клетки или крошечные фрагменты многоклеточных организмов. Таким образом, мы можем добавить перекись водорода к грибной культуре без ущерба для роста мицелия, но небольшие источники заражения при этом погибнут.

Такой подход дает массу преимуществ. Совершенно очевидно, что в нашем случае отпадает необходимость в дорогостоящих, тщательно подобранных приборах и оборудовании для защиты окружающей среды от заражений. За счет добавления перекиси водорода к среде с грибной культурой становится возможным успешное осуществление всех стадий грибного культивирования, от изоляции мицелия до плодоношения, в нестерильной среде и без фильтрации воздуха. Становятся ненужными специальные чистые комнаты, ХЕПА-фильтры, префильтры, ламинарные боксы, ультрафиолетовые лампы, стерильные тамбуры, боксы с перчатками для стерильных работ (т. н. главбоксы) и любое другое оборудование, связанное с контролем бактериального заражения окружающей среды. Даже микропористые фильтры на пакетах или крышках банок становятся излишними. При использовании перекиси минимальный набор оборудования, необходимого для контроля над заражениями, может быть сведен к градуированным емкостям, источнику кипящей воды и большой кастрюле для обработки паром (или скороварке, для пущей безопасности). Это ненамного больше, чем можно найти на обычной кухне. В то время, как традиционные методы культивирования грибов требуют выполнения сложных стерильных техник и безупречной чистоты исполнителя при работе с агаровыми культурами и посевным мицелием, использование перекиси позволяет достичь успеха при умеренном соблюдении требований к стерильности и минимальном внимании к личной гигиене. Более того, становится возможным осуществлять выгонку плодовых тел (даже тех видов, которые распространяют чрезвычайно большое количество спор) в том же самом здании, где содержатся агаровые культуры и выращивается посевной мицелий, причем без опасения, что споры, распространяемые плодовыми телами, вторгнутся в агаровые культуры и уничтожат их. Перекись водорода однозначно убьет споры того же самого гриба, мицелий которого она (перекись) защищает.

Приобретают ли микроорганизмы, вызывающие заражение, устойчивость к воздействию перекиси, как это происходит в случае с антибиотиками? И да и нет. Многие из таких микроорганизмов уже устойчивы к перекиси, и если они образовали колонию, дальнейший ее рост будет очень интенсивным. Например, живая форма сине-зеленой плесени Aspergillus очень устойчива к перекиси. Тем не менее, перекись в достаточной концентрации несомненно преодолевает защитные механизмы одноклеточных организмов и отдельных спор, а также очень небольших изолированных многоклеточных организмов.

Чего перекись не может обеспечить

Перекись не отменяет полностью необходимость соблюдения правил стерильной работы. Повторюсь: не смотря на то, что добавленная перекись будет уничтожать отдельные споры, грибки и бактерии, пробравшиеся в ваши грибные культуры (а именно эти микроорганизмы являются основным источником проблем с заражением), перекись не сможет прекратить жизнедеятельность развитых многоклеточных организмов (например зеленой плесени), если размер колонии превысит некоторый размер. Перекись также не будет слишком эффективным против значительного скопления спор плесени. По всей видимости, многоклеточные организмы и большие скопления проросших спор способны вырабатывать достаточное количество разрушающих перекись ферментов для того, чтобы защитить себя от высоких концентраций перекиси во внешней среде. И в связи с тем, что микроскопические многоклеточные организмы и скопления спор могут находиться на ваших руках, частицах грязи и пыли, вам все равно придется соблюдать определенные меры предосторожности и держать ваши руки и любые нестерильные предметы подальше от культур на ранних сроках их развития, даже при добавлении перекиси. Несмотря на то, что можно не бояться оставлять культуры на открытом воздухе в течение непродолжительного времени для выполнения манипуляций или проверки их состояния, вам все равно придется предпринимать разумные меры против заражения. Например, не стоит более использовать крышку от чашки петри, если она упала на пол. Не стоит также допускать попадания на культуру какого-либо мусора или проникновения насекомых. Хорошим правилом будет периодическое вытирание пыли с полок, используемых для инкубации культур. В любом случае придется стерилизовать на пламени (или как-то еще) всякий инструмент, который используется для переноса ломтиков мицелия с одной культуры на другую. Лично я регулярно протираю пальцы спиртом перед выполнением инокуляций субстрата или агаровых культур. Я делаю то же самое со всеми поверхностями, на которых я произвожу манипуляции с чашками петри. Это уменьшает вероятность попадания в культуру крупных частиц и способствует защите открытого мицелия.

Очень важно знать и помнить, что перекись не защищает сам грибной мицелий от аэробных контаминантов. Мицелий разлагает перекись, с которым он контактирует, поэтому любые аэробные контаминанты, находящиеся по соседству с мицелием, будут ограждены от губительного воздействия перекиси. Таким образом, в общем случае, перекись лишь защищает питательную среду или субстрат от аэробного заражения. Необходимость самой аккуратной работы остается актуальной для процесса переноса мицелия или для любой другой операции, подразумевающей нахождение мицелия в нефильтрованной атмосфере. Поэтому, если заражение мицелия все-таки произошло, вам придется начать все заново с чистой, незараженной культуры или каким-либо образом очистить мицелий от контаминантов. Мы рассмотрим этот вопрос позже.

Напоследок отмечу, что перекись не является стерилизующим агентом, за исключением столь высоких концентраций, когда его использование уже не совместимо с ростом грибов. Таким образом, вы, в общем случае, не можете использовать перекись, как таковую, для стерилизации питательной среды или субстратов. В концентрациях же, совместимых с ростом грибов, перекись водорода не будет уничтожать живые формы плесневых контаминантов, находящихся в среде и подвергнется быстрому разложению под воздействием ферментов, содержащихся в нестерильных органических материалах. Хотя некоторые споры бактерий и будут убиты перекисью после ее добавления в нестерильную среду, гораздо большее число контаминатнов без труда выживет и через непродолжительное время начнет свой рост. В этой связи следует запомнить: материалы среды и контейнеры должны быть пастеризованы перед добавлением перекиси или заполнением перекисесодержащими средами; питательные среды, которые содержат сырые, не подвергавшиеся обработке органические вещества, должны быть стерилизованы под давлением для того, чтобы разрушить ферменты, разлагающие перекись. И последнее: вода, не подвергнутая стерилизации под давлением, при использовании в составе среды с перекисью должна быть чистой и не должна содержать видимых частиц. Любые частицы органической и даже неорганической природы, вносимые с водой в среду, могут содержать живые микроорганизмы и/или разлагающие перекись катализаторы, которые не обязательно будут уничтожены во время пастеризации.

Безопасность применения перекиси водорода и влияние на окружающую среду

При использовании 3 % перекиси водорода не требуется соблюдения каких-либо особых мер предосторожности. Токсичность перекиси в такой концентрации весьма низка и он полностью разлагается на воду и кислород при разливании или попадании внутрь. 3 % перекись не обладает запахом, не оставляет пятен и не вызывает ожогов. При температуре ниже 60 °C (температура очень горячей воды из-под крана) она даже не действует как отбеливатель. Все свидетельствует о том, что такая перекись не опасна для окружающей среды.

В связи с тем, что промышленная перекись изготавливается химическим путем, а не извлекается, скажем, из натуральных источников, он, скорее всего, не может рассматриваться как экологически чистая субстанция, отвечающая требованиям новомодных сертификационных стандартов. Тем не менее, я считаю, что использование перекиси вполне соответствует духу экологически чистого культивирования. Поскольку перекись, добавленная к грибной культуре, полностью разлагается на воду и кислород по мере того, как грибной мицелий захватывает субстрат, после снятия урожая в грибах от перекиси не останется и следа. Разложение перекиси происходит по причине вполне естественных процессов метаболизма. Более того, перекись водорода сама по себе может быть обнаружена во всех аэробных организмах и во многих натуральных средах. С незапамятных времен пчелы выделяют ферменты, добавляющие перекись в нектар, защищая его от бактерий, грибков и плесени, чем и обусловлены антибактериальные свойства меда. Мицелий по крайней мере некоторых видов грибов производит собственную перекись, которая помогает разрушать древесные субстраты, встречающиеся на пути этих грибов. Даже в человеческом организме перекись является частью защитных механизмов, способствующих выздоровлению. Более того, тысячи приверженцев перекисной системы оздоровления по всему свету принимают внутрь перекись во время еды и называют это перекисной терапией. Считается, что ежедневный прием перекиси приводит к оздоровлению при различных заболеваниях и усиливает жизненные силы организма, а некоторые люди принимают перекись годами (хотя лично я бы не рекомендовал подобных методик…). Наконец, применение перекиси избавляет от использования ресурсоемкого оборудования, оснастки и сопутствующих приспособлений, упрощая каждый этап процесса культивирования грибов.

Есть один вопрос, относящийся к воздействию перекиси на грибной субстрат в качестве оксиданта. Хлор, когда он реагирует с органическими материалами типа бумажной пульпы, производит небольшие количества диоксина, очень опасного канцерогенного вещества. Перекись не производит диоксина и, вследствие этого,

борцы за экологию призывают производителей бумаги отбеливать бумажные волокна перекисью, а не хлором. Опять же, нельзя полностью исключать того, что перекись может вызывать образование других опасных веществ, когда она реагирует с органическими материалами в грибных субстратах, хотя я считаю это весьма маловероятным. Например, аэробные организмы прошли через миллионы лет эволюции, окруженные перекисью и имея ее внутри себя. Перекись образуется в процессе нормального аэробного метаболизма и формируется в естественных условиях при реакции воды с кислородом под воздействием солнечного ультрафиолета. Это означает, что аэробные организмы, скорее всего, приобрели метаболический механизм, позволяющий безопасно иметь дело с различными продуктами окисления, которые образуются в результате реакции перекиси с биологическим материалом. Кроме того, перекись водорода в стерилизованных грибных субстратах ведет себя химически стабильно, а концентрация перекиси, которую мы будем использовать, так низка, что реакции окисления в субстрате должны быть весьма незначительными. Наконец, я ни разу не наблюдал мутагенного или токсического влияния субстрата, обработанного перекисью, на мицелий или плодовые тела грибов. Агаровые среды, содержащие перекись водорода, дают превосходные, здоровые ореолы мицелия, а конечные плодоносящие культуры производят такие же замечательные грибы, как и при использовании традиционных методов культивирования.

Стабильность

3% раствор перекиси, имеющийся в продаже в супермаркетах и аптеках, содержит стабилизатор на основе фосфорной кислоты и достаточно хорошо сохраняется в прохладном месте. После добавления перекиси водорода к стерилизованной и охлажденной среде, перекись, очевидно, разлагается с невысокой скоростью. Точное значение времени, в течение которого перекись сохранит свои свойства, вероятно, определяется сложной зависимостью, включающей состав среды, концентрацию перекиси и температуру. Тем не менее, мой опыт показывает, что перекись обеспечивает защиту от заражений в течение достаточно длительного времени, чтобы различные виды грибов успели безопасно колонизировать субстрат.

С другой стороны, перекись водорода не следует добавлять в горячую среду, если только вы не собираетесь скомпенсировать потерю перекиси при разложении, добавляя большее его количество. В связи с тем, что перекись приобретает свойства отбеливателя при температуре выше 60 °C, она будет легко разлагаться при контакте с комплексными органическими материалами при температурах от 60 °C и выше. Таким образом, перед добавлением перекись вам придется подождать, пока среда остынет — если не до комнатной температуры, то хотя бы до такой, которую терпит рука.

В противовес своему поведению в чистом растворе или стерилизованной среде, перекись быстро разлагается в присутствии перекисеразрушающих ферментов, как это случается при промывании раствором перекиси ран. Разрушенные клетки кожи и кровеносных сосудов, находящиеся в ране, в изобилии содержат перекисеразрушающие ферменты, что вызывает быстрый распад перекисного раствора и выделение пузырьков кислорода. Похожие ферменты, называемые каталаза и пероксидаза, найдены во всех разновидностях живых или бывших живыми тканях, если только они не подвергались температурному воздействию или глубокой переработке. Таким образом, необработанное зерно, мука, опилки, дерево и т. д. будут разлагать перекись за короткое время. Это означает, что вам придется избегать контакта раствора перекиси с подобными материалами при хранении. Это также означает, что если вы хотите включить указанные материалы в состав питательной среды, вам придется удостовериться в том, что перед добавлением перекиси все компоненты среды были подвергнуты тщательной тепловой обработке с целью уничтожения перекисеразрушающих ферментов.

Я предпринимаю определенные меры для обеспечения чистоты раствора перекиси при его хранении. Перед забором перекиси я, в первую очередь, протираю пробку и верхнюю часть бутылки спиртовым раствором, чтобы удалить частицы, которые могут содержать живые микроорганизмы.

После этого я либо отливаю перекись в пастеризованный мерный цилиндр, либо отбираю раствор с помощью чистой, пастеризованной пипетки, снабженной на верхнем конце ватным тампоном-фильтром. Пипетки не нуждаются в автоклавировании, но их требуется, как минимум, обрабатывать в течение нескольких минут кипятком (заполняя выше верхней градуировочной отметки, но ниже ватного тампона), а затем остужать перед тем, как производить забор перекиси.

Градуированный цилиндр объемом 100 мл может послужить удобным сосудом для погружения 10 мл пипетки в кипяток. Нагревание убьет все живые организмы, а перекись уничтожит оставшиеся термоустойчивые споры. Я также слежу за тем, чтобы не допускать закручивания пробки на бутылке, если пробка контактировала с источником заражения.

Различия в концентрации перекиси, поступающей от производителей

Суровая правда жизни состоит в том, что 3 % (согласно этикетке на бутылочке) раствор перекиси водорода, приобретенный вами в аптеке или магазине, на самом деле может иметь несколько иную концентрацию. Концентрация может заметно отличаться как в сторону больших, так и в сторону меньших значений. В какой-то степени можно избежать недоразумений, если не покупать просроченную перекись, проверяя срок истечения ее годности на этикетке (если он указан) и покупая заведомо свежий раствор (например, на бутылках, которые покупаю я, указан только месяц истечения срока годности, а год — не указан). Тем не менее, даже указанный срок годности не дает абсолютной уверенности в том, что концентрация действительно составляет 3 %. Поэтому важно уметь измерять концентрацию перекиси в растворе. Простой способ такого измерения основан на разложении перекиси из пробного образца раствора и измерении количества высвобожденного кислорода, которое я осуществляю с помощью надувного шарика.

Вот мой способ измерения примерной концентрации перекиси:

Возьмите чистую пробирку (предпочтительно с отвернутым краем на горлышке или с накручивающимся колпачком), небольшой надувной шарик и ломтик гриба такого размера, который может быть легко помещен в пробирку. Ломтик можно вырезать из ножки гриба, а кожицу нужно снять, чтобы обнажить большое количество разрушенных клеток. Самые лучшие результаты получаются с молодыми, быстро растущими грибами. Если под рукой не окажется грибов, можно использовать кусочек банана или другого фрукта, покрытого кожурой. Понадобятся также раствор перекиси, резиновое колечко, пастеризованная измерительная пипетка, мерный цилиндр на 100 мл и кастрюлька с водой.

1. С помощью пастеризованной пипетки отберите 5 мл раствора перекиси из бутылки и перенесите его в пробирку.

2. Поместите ломтик гриба на верхнюю часть пробирки (пока не допускайте попадания ломтика в перекись).

3. Освободите шарик от воздуха и натяните его на горлышко пробирки (пробирку держите наклоненной, чтобы ломтик гриба не соскользнул в раствор, пока шарик не поставлен на место).

4. Зафиксируйте резиновым колечком шарик на горлышке пробирки, чтобы газ не начал выходить наружу по мере повышения давления (я считаю наиболее эффективным использовать резинку от порванного колечка, которой можно плотно обвязать шарик на горлышке пробирки).

5. После того, как шарик сел на место, стряхните ломтик в раствор перекиси. Раствор должен немедленно вспениться из-за выделения пузырьков кислорода.

6. Взбалтывайте пробирку. Раствор перекиси должен по большей части разложиться в течение пяти или десяти минут, в зависимости о количества каталазы/пероксидазы в грибном ломтике.

7. Когда разложение почти закончится, вы увидите, что выделение пузырьков замедлилось, а сами пузырьки стали довольно мелкими. Шарик, тем временем, должен подняться и стать упругим, т. к. он наполнится высвобожденным кислородом.

Со времен занятий по химии в колледже я помню, что 5 мл 3 % раствора перекиси водорода должны произвести примерно 4 9 мл кислорода, если перекись полностью разлагается при комнатной температуре и атмосферном давлении. Измерить количество кислорода, выделенного при разложении перекиси, можно в следующем порядке:

1. Наполните градуированный мерный цилиндр водой и поставьте его вверх ногами в кастрюлю с водой, удостоверившись, что в цилиндре нет пузырьков воздуха.

2. Перекрутите шарик у горлышка пробирки, чтобы кислород не выходил наружу, снимите шарик с пробирки, крепко удерживая скрученную часть, и поместите шарик под воду в кастрюле.

3. Аккуратно выпускайте газ из шарика в перевернутый мерный цилиндр так, чтобы газ замещал находящуюся в цилиндре воду.

4. Удерживая открытый конец мерного цилиндра под водой, определите по нанесенной на цилиндр шкале значение объема кислорода.

Когда я проделал такое измерение в первый раз, у меня получилось 52 мл газа внутри градуированного цилиндра от разложения 5 мл раствора перекиси. Учитывая, что в сдутом шарике перед началом измерения могло оставаться до 3 мл воздуха, раствор перекиси произвел количество кислорода, весьма близкое к теоретическому значению для 5 мл 3 % раствора.

Теперь рассмотрим, как вычисляется нужное количество раствора перекиси, если тест дает значения концентрации выше или ниже 3 %:

1. Разделите объем кислорода, ожидаемый от 5 мл 3 % раствора (4 9 мл, если шарик совершенно пустой или 52 мл, как в рассмотренном выше примере, учитывая несколько миллилитров воздуха, оставшихся в шарике) на объем кислорода, который вы действительно получили.

2. Умножьте предыдущее значение на объем раствора перекиси, который вы добавили бы к среде или субстрату, если бы это был 3 % раствор (это значение приводится в соответствующих разделах этой книги; например в разделе, посвященном агаровой культуре, вам будет нужно добавить 6 мл 3 % перекиси к 1 л стерилизованной агаровой среды).

Информация о точной концентрации перекиси наиболее важна, когда вы приготовляете агаровые чашки (см. ниже), так как вам придется работать с концентрациями, которые близки к нижнему порогу эффективности. При изготовлении посевного мицелия вы будете иметь дело с заметно более высокими концентрациями, так что возможностей для вариаций будет больше. Для приготовления основного субстрата я использую меньше перекиси, чем для посевного мицелия, но и в этом случае остается некоторая свобода для подбора концентраций. Я рекомендую производить тест с шариком для каждой новой бутылки с раствором перекиси, который используется для работы с агаром а также проверять перекись, который используется для посевного и основного субстрата, если только вы полностью не уверены в надежности поставщика. Поступая, таким образом, вы будете совершенно уверены, что культура защищена настолько, насколько это ожидается. Не исключено, что вам придется провести исследование местного рынка и выбрать продавца, который предоставляет наиболее надежный продукт. Звучит парадоксально, но может оказаться, что самый дешевый вариант является также и самым лучшим, потому что регулярный оборот продукции на складе поставщика будет там, где перекись дешевле. Если перекись отсутствует в ваших местных магазинах, то есть смысл поискать его на фирмах, занимающихся поставкой химреагентов. Они зачастую предлагают 30 % или 35 % раствор перекиси, который можно затем развести. Магазины, обслуживающие бассейны, также могут предлагать перекись в подобной концентрации. Имейте в виду, однако, что столь концентрированные растворы гораздо более опасны, чем стандартный 3 % раствор. Прочтите все предупреждающие надписи на этикетке бутыли и соответствующе обращайтесь с этим раствором.

Первой стадией выращивания грибов является размножение грибной ткани (мицелия) на агаре в чашках петри и последующий уход за ней. Полученные первичные культуры используются для хранения, размножения и поддержания грибных штаммов в здоровом состоянии путем последовательных пересевов, а также для инокуляции вторичных культур — посевного мицелия.

Подготовка чашек петри.

Существует немало рецептов агаровых сред, которые могут быть использованы для выращивания грибного мицелия на чашках петри. Я испробовал некоторые из них, но в настоящее время использую только один: мальт-дрожжевой агар (солод-дрожевой агар, malt yest agar), известный также как MYA. Этот агар подходит практически для любого вида грибов, которые я пробовал выращивать. Данная среда не настолько питательна, чтобы немедленно подвергнуться заражению, хотя многие штаммы распространяются по чашке петри на MYA за две или три недели. По моему мнению, при использовании перекисных сред нет особой необходимости в более быстром росте мицелия, потому что быстрое зарастание среды заставит вас производить пересевы на новые чашки для того, чтобы сохранить мицелий свежим. Кроме того, после нескольких последовательных переносов мицелия из чашки в чашку могут возникнуть проблемы со старением (сенесценцией) мицелия и поэтому некоторые грибоводы рекомендуют в таких случаях начинать все заново, используя сохраненную эталонную культуру. Согласно такому подходу, чем быстрее мицелий растет, тем раньше его придется поместить на хранение, поэтому я бы предпочел мицелий, который растет относительно медленно.

Я работаю с культурами в чашках петри, которые растут на среде, содержащую перекись. Заражения на перекисных чашках случаются редко и при соблюдении некоторых мер предосторожности вам не придется покупать ламинарный шкаф или строить главбокс для того, чтобы оградиться от контаминантов. Вы можете наполнять чашки на открытом воздухе на кухне. Хранить и заращивать чашки можно где угодно, лишь бы это место было относительно чистым, а условия внешней среды были бы подходящими для роста мицелия. Тем не менее, обратите внимание на рекомендации в конце этого раздела.

Мальт-дрожжевой агар, MYA

Вот рецепт, который я использую для приготовления 1 литра мальт-дрожжевого агара:

Если вы приобретаете в магазине готовую смесь для приготовления мальт-дрожжевого агара, то она, скорее всего, уже будет содержать первые три ингредиента: агар, солод и дрожжи. Остальные ингредиенты вы можете добавить самостоятельно. Сверьте по инструкции производителя, сколько смеси рекомендуется добавлять к 1 л воды. Обычно требуется примерно 40 или 50 грамм. В зависимости от количественного соотношения агара и солода, можно сократить количество смеси вдвое от рекомендованного и получить среду, которая лучше подходит для длительного и здорового роста мицелия.

Я приготавливаю агаровую среду для чашек в такой последовательности:

1. Смешиваю все ингредиенты в банке с необходимым количеством воды. Банка должна быть в два раза больше по объему, чем объем полученной среды, чтобы агар не выплескивался при закипании во время приготовления.

2. Корректирую pH среды, добавляя небольшое количество питьевой соды (моя вода является кислотной, но если у вас вода щелочная, то можно добавить немного уксуса. Смотрите также замечания об измерении pH субстрата в главе, посвященной приготовлению основного субстрата).

3. Стерилизую среду в скороварке, агар при этом растворяется. (Я использую воду из-под крана без всяких проблем. Более того, когда я растил мицелий на среде, приготовленной на дистиллированной воде, рост мицелия был заметно более медленным). Свободно накрываю банку крышкой и стерилизую в скороварке под давлением 1 атм. в течение не более 10 минут, предварительно дав агару разойтись в течение 10 минут перед тем как закрыть клапан давления. (Если вы приобрели готовую смесь для MYA-arapa, в инструкции к ней может быть указано значительно большее время стерилизации, например, 45 минут. Не делайте этого! 20 минут — это более, чем достаточно, а при дальнейшей стерилизации будут образовываться вредные для мицелия продукты карамелизации среды). Вместе со средой я стерилизую также и набор чашек петри, поместив их в большую консервную банку из-под томатов, накрытую фольгой (я использую пластиковые чашки петри многократного использования и одного литра агара хватает на то, чтобы наполнить около 30 чашек).

4. По окончании стерилизации я осторожно убираю скороварку с плиты и сбрасываю давление пара. Аккуратно вынимаю банку со средой и ставлю ее на стол остывать на открытом воздухе. Нет никакой необходимости беспокоиться о попадании в банку не стерильного воздуха, если воздух более-менее свободен от пылевых частиц. Контаминанты, попавшие в банку с воздухом, погибнут после добавления в среду перекиси.

5. Когда банка остынет и ее можно комфортно брать руками, я помещаю ее в кастрюлю с горячей водой, потому что при этой температуре агар уже близок к застыванию.

6. Добавляю раствор перекиси с помощью пастеризованной пипетки и быстро перемешиваю среду круговыми движениями банки, изменяя пару раз направление вращения. Я стараюсь избегать образования большого количества пузырьков, которые потом могут остаться на поверхности агара.

7. После добавления перекиси я немедленно перехожу к чашкам петри, которые к этому времени расставлены на чистом столе. Свободно разливаю среду в чашки, накрывая их крышками после заполнения агаром.

8. После того, как агар застынет, я убираю чашки на несколько дней на слегка прикрытый лоток, чтобы подсушить агаровую среду.

Агар, приготовленный без автоклавирования

Если у вас нет скороварки или вы не хотите ее использовать, вы все равно можете приготовить защищенные агаровые чашки путем кипячения или обработки паром агаровой среды. При этом придется несколько изменить рассмотренную выше рецептуру. Вам нужно будет заменить ингредиенты, содержащие перекисеразрушающие ферменты на другие ингредиенты, которые не содержат таких ферментов. В рассмотренных ранее рецептах агар, солод и гранулированные опилки не содержат перекисеразрушающих ферментов, а дрожжи, мука и корм для кроликов — содержат. Для того чтобы использовать агаровую среду, нам обычно приходится обрабатывать ее в скороварке, чтобы уничтожить перекисеразрушающие ферменты в этих ингредиентах. Тем не менее, указанные ингредиенты могут быть заменены на другие. Дрожжи служат источником витаминов, поэтому их можно заменить небольшим количеством свежего витаминного драже группы В. Поскольку витаминные препараты производят искусственным путем, они не содержат ферментов. Молотое зерно и кроличий корм являются источником белка, поэтому эти ингредиенты можно заменить на другие перекисесовместимые протеиновые добавки. В общем случае, только подвергнутые глубокой переработке субстанции не содержат перекисеразрушающих ферментов, например, желатин, соевое молоко, обезжиренное сухое молоко и т. п. Для того, чтобы проверить исследуемую добавку на наличие ферментов, смешайте небольшое ее количество с 3 % раствором перекиси и наблюдайте на появлением пузырьков. Отсутствие пузырьков означает отсутствие ферментов.

Вот рецепт для приготовления 1 литра агара без стерилизации в скороварке:

1. Прокипятите банку с этой средой (а также чашки петри) в кипящей воде в кастрюле, закрытой массивной крышкой, в течение примерно 45 минут, что позволит агару раствориться и уничтожит все живые организмы в среде (чашки петри можно стерилизовать даже дольше).

2. Выньте банку, дайте ей остыть и добавьте перекись, как в первом рецепте. Перекись убьет все споры, оставшиеся в среде. Я добавляю немного больше перекиси в неавтоклавированные чашки, примерно 8 мл на литр среды. Опыт показывает, что неавтоклавированные чашки в среднем подвергаются заражениям чаще, чем автоклавированные перекисные чашки, но и в этом случае результаты заметно лучше, чем при использовании чашек без перекиси.

Следите за образованием подтеков агаровой среды, которые остаются на внешней стороне чашек петри. Если их не вытирать, они через несколько дней покроются плесенью и затем споры плесени проникнут внутрь чашек и начнут прорастать на внешней кромке агара.

Если вы, как и я, работаете с чашками петри многократного использования, очищайте их тщательным образом от старого агара. Даже самое незначительное количество старого агара, оставшегося в чашке, если оно не контактирует с перекисью в свежем агаре, при последующем использовании чашки может обрасти плесенью и послужить своеобразным трамплином для последующего заражения.

Наполнение чашек охлажденной агаровой смесью дает определенное преимущество, которое заключается в заметно меньшем образовании конденсата на внутренней поверхности верхней чашки, чем при заливке горячей смеси. Совершенно очевидно, что в этом случае вам не придется принимать дополнительных мер по борьбе с конденсатом, таких как стряхивание капель с верхних чашек или подогревание чашек для испарения капель. Через более прозрачные чашки будет легче наблюдать за тем, что в них происходит. Тем не менее, поверхность агара все-таки требует некоторого подсушивания, поэтому я оставляю перед использованием открытые чашки на день при комнатной температуре, слегка прикрыв их пергаментной бумагой для защиты от пыли. Чашки с агаром, которые были обработаны паром, получаются более влажными, чем те, в которых агар был стерилизован в скороварке (т. к. температура обработки была ниже, а время обработки — меньше), поэтому их приходится подсушивать в течение более длительного времени.

Если после заполнения чашек у вас осталось некоторое количество неиспользованного агара, его можно сохранить в стерильном виде в холодильнике. Когда вы решите снова использовать его, вы можете повторно расплавить агар, но в этом случае вам также придется снова добавить в среду перекись, потому что нагрев агара до температуры плавления вызовет разрушение перекиси, добавленной в первый раз.

Есть несколько путей приобретения грибного мицелия для дальнейшего выращивания на агаре. Можно прорастить грибные споры в питательной среде. Можно извлечь в асептических условиях ткань из свежего гриба и бережно перенести на агар для дальнейшего роста. Можно также купить грибную культуру у коммерческого поставщика, обычно в форме агара в пробирке или чашке петри.

В связи с тем, что перекисесодержащая питательная среда убивает грибные споры, я пока что не занимался проращиванием спор для получения грибной культуры. Напротив, я предпочитаю приобретать грибной мицелий у поставщиков с проверенной репутацией. Я смотрю на это следующим образом: поставщик уже проделал непростую работу по изоляции грибного штамма с нужными качествами и, покупая грибную культуру, я с достаточной степенью уверенности приобретаю мицелий, имеющий точно такие же качества. Для контраста, если вы пытаетесь вырастить грибной штамм, который был изолирован после проращивания спор или клонирования, и он не плодоносит, вы не будете знать, где сокрыты причины неудачи: в условиях роста или самом штамме (споры подобны семенам: их генетические характеристики могут совпадать с родительскими, а могут и не совпадать). Вы можете потратить массу времени впустую, пытаясь добиться плодоношения от бесполезного штамма. Более того, если вам удастся в заданных условиях изолировать культуру и вы по каким-то причинам потеряете ее, то, если культура не была приобретена у коммерческого поставщика, вы не сможете просто вернуться к поставщику и получить дополнительную «копию» штамма. Вам придется получить новый штамм, отвечающим определенным условиям.

Когда вы покупаете грибную культуру у коммерческого производителя, подразумевается, что эта культура будет использована для выращивания (и, если вы так решите, продажи) посевного мицелия, субстратных блоков или плодовых тел данного грибного штамма. Также подразумевается, что вы не будете использовать приобретенную культуру для организации собственного банка штаммов и продавать агаровые культуры другим с целью коммерции. Если вы хотите продавать агаровые культуры, то из соображений этики, вам нужно будет клонировать мицелий из дикорастущих образцов или получить его, проращивая споры.

Как бы то ни было, клонирование собственной грибной культуры из диких образцов, собранных на природе, также может быть увлекательным. Возможно, вам удастся получить плодоносящий штамм первого порядка. Если вы захотите попробовать произвести клонирование, вам потребуются несколько чашек с перекисным м агаром (см. ниже), скальпель, спиртовка и свежий гриб.

Для того, чтобы клонировать гриб:

1. Очистите его внешнюю поверхность, чтобы на ней не осталось отдельных частиц мусора.

2. Разломите шляпку гриба (или основание ножки) для получения открытой ткани. Сделайте это настолько чисто, насколько возможно.

3. Зажгите спиртовку и простерилизуйте на пламени лезвие скальпеля. Вырежьте из гриба небольшой кусочек чистой ткани, которая не контактировала с внешней поверхностью. Эту операцию, очевидно, проще провести с более толстым, мясистым грибом, нежели с тонким образцом.

4. Когда кусочек гриба окажется на скальпеле, переместите его на середину одной из агаровых чашек. В связи с тем, что вероятность неудачи остается достаточно высокой, по возможности, сделайте еще несколько переносов на отдельные чашки.

5. В заключение, поместите стопку чашек в чистый пластиковый пакет и поставьте их в подходящее место для инкубации при комнатной температуре.

6. Растущий мицелий, в случае успеха, должен стать заметным через несколько дней, распространяясь по сторонам от кусочка грибной ткани.

Плесень или бактерии тоже могут начать свой рост. В этом случае вам может потребоваться вырезать небольшой кусочек чистого мицелия и перенести его на свежую чашку. Если вы решите произвести дополнительное клонирование мицелия из зараженной плесенью чашки, сделайте это до того, как плесень приобретет темную окраску и созреет до образования спор. В противном случае, вы просто будете переносить плесень вместе с мицелием.

Если вы попытаетесь клонировать мицелий из дикорастущего гриба, запомните, что имеющийся в вашей питательной среде перекись водорода, сама по себе, не сможет очистить мицелий от находящихся в нем источников заражения. Если исходный материал загрязнен, и вы не можете получить чистую ткань путем разламывания ножки или шляпки гриба, который вы собираетесь клонировать, перекись в агаре уже ничем не поможет. Перекись не является стерилизующим агентом. Вместе с тем, если имеющийся материал изначально чист, перекись в агаре позволит, как минимум, снизить число случаев скрытого заражения в полученных агаровых чашках.

После того, как вы приобрели грибную культуру, вам придется найти способ долговременного хранения ее образцов, чтобы с них можно было начать работу заново, если что-то случится с активной культурой, которой вы пользуетесь в настоящее время. Простой метод хранения, которым пользуюсь я, предполагает соскабливание некоторого количества мицелия с агаровой чашки и перенос его в снабженную навинчивающимся колпачком пробирку со стерильной дистиллированной водой (спасибо Joe Kish за то, что он подсказал мне этот метод). Оказавшись в дистиллированной воде, мицелий переходит в состояние спячки (состояние покоя) и некоторые штаммы могут находиться в нем неопределенно долгое время (грибы типа вешенки, по моему опыту, могут храниться в таком виде около года). В этом случае даже не требуется охлаждение.

Несмотря на то, что традиционным способом хранения культур считаются пробирки с косым агаром, если вы не имеете доступа к жидкому азоту, пробирки не позволяют сохранять штаммы слишком долго — в лучшем случае, полгода.

Далее, когда вы готовите штаммы к длительному хранению, я не рекомендую при этом использовать перекись водорода. Дело в том, что на самом деле я не знаю, какое влияние может оказать перекись на культуры, находящиеся на хранении в течение длительного времени. Ускоряет ли он старение? Вызывает ли он постепенное ослабление штаммов и их генетические изменения? Я просто не исключаю, что могут быть проблемы с некоторыми видами, которые вы хотите сохранить. Кроме того, активно растущие культуры обладают лучшей защитной способностью против добавленной перекиси, чем находящиеся на хранении спящие культуры, которые могут оказаться более подверженными повреждениям. Поэтому, несмотря на то, что пробирки с косым агаром и пробирки с дистиллированной водой могут быть легко приготовлены с перекисью, хранение штаммов без перекиси видится более безопасным. Приготовить пробирки с чистой дистиллированной водой очень просто. Разлейте воду по пробиркам, слегка накрутите колпачки и простерилизуйте пробирки в скороварке в течение получаса. Если у вас нет скороварки, попробуйте прокипятить пробирки в течение часа, добавив в них по несколько капель 3 % перекиси. Перекись убьет термоустойчивые споры, а длительное кипячение разрушит перекись. В отличие от чашек петри, пробирки можно держать над пламенем при открывании и закрывании, что помогает сохранить стерильность без фильтрации атмосферы при переносах мицелия. Подготовленные к хранению пробирки я заворачиваю в пищевые пластиковые пакеты и отношу в подвал, где для их содержания предусмотрено безопасное место.

Я провожу инокуляцию свежих чашек и пробирок, перенося в них с помощью скальпеля, простерилизованного в пламени спиртовки, небольшие кусочки обросшего мицелием агара, взятого из чашки, освоенной здоровой культурой. При использовании нагретого скальпеля для вырезания кусочков агара, я сперва охлаждаю скальпель, погружая его в агар на чашке, которая служит источником мицелия для переноса. Традиционный метод подразумевает охлаждение скальпеля путем погружения в агар на свежей, неиспользованной чашке. Нагретый скальпель может вызвать разложение перекиси в месте его погружения в агар. В нефильтрованном воздухе это место, будучи защищенным в меньшей степени, может стать исходной точкой для роста вредоносных микроорганизмов. Данное обстоятельство не является проблемой для чашки, из которой я произвожу перенос, потому что дальнейшее ее использование не предусмотрено. К свежей чашке указанная проблема относится в гораздо большей степени. Вот почему я охлаждаю скальпель в колонизированной чашке.

Если вы инокулируете чашку с использованием культуры, свободной от перекиси, не применяйте инокуляционную петлю, за исключением тех случаев, когда требуется выудить большой фрагмент мицелия. По моему опыту, незначительные фрагменты мицелия, извлеченные с помощью инокуляционной петли, не способны легко основать колонию в присутствии перекиси в концентрации, эффективной для борьбы с заражениями, особенно если используемая культура не была выращена в присутствии перекиси. Мицелий имеет гораздо лучшие шансы на приживание, если его сгусток взят из пробирки с дистиллированной водой или кусочек агара с мицелием извлечен из пробирки при помощи скальпеля или другого заостренного инструмента (признаюсь, что доставать кусочки агара из пробирки при помощи скальпеля, по меньшей мере, неудобно).

Культуры, которые предварительно не подвергались воздействию перекиси, зачастую «замирают» на некоторое время, в течение которого мицелий адаптируется к новым условиям среды. Иногда мицелий начинает расти по направлению от перекисного агара. Подобное поведение можно наблюдать, когда производится перенос мицелия из чашки, первоначально содержавшей перекись, который затем подвергся разложению после полного освоения всей поверхности агара мицелием и последующей избыточной инкубации в течение нескольких дней. Тем не менее, рано или поздно мицелий адаптируется к новым условиям и начнет нормальный рост по всей поверхности свежей среды.

У меня никогда не было проблем со штаммами, которые длительное время находились в присутствии перекиси. Обычно я осуществляю до десяти переносов мицелия на перекисесодержащую среду, после чего возвращаюсь к эталонным культурам, хранящимся без перекиси, хотя мой выбор этого числа переносов является произвольным, а возврат к эталонной культуре может быть совсем не обязательно.

Заметьте, что перекись защищает только ту поверхность агаровой чашки, которая не содержит растущего на ней мицелия. Мицелий, сам по себе, является незащищенным, потому что он разлагает перекись по мере своего роста. В этой связи, чашки с мицелием, который полностью освоил поверхность агара и далее продолжал свой рост в течение нескольких дней, с большей вероятностью содержат источники скрытого заражения.

Предотвращение скрытого заражения с помощью инокуляции нижней стороны агара.

При последовательных переносах мицелия в нефильтрованной атмосфере, в нем могут аккумулироваться контаминанты, даже если в агаре всегда присутствует перекись, а мицелий никогда не осваивает всей поверхности чашки. Вы можете никогда не увидеть заражения, растущего на грибном мицелии в чашках, но при этом невидимые микроорганизмы будут понемногу обустраиваться на месте. Такое «тайное заражение» может представлять проблему вне зависимости от того, используете вы перекись в посевном и основном субстрате, или нет. Естественно, что при использовании не защищенного перекисью посевного или плодоносящего субстрата скрытые заражения могут расцвести на незащищенной среде с большей вероятностью.

Для того, чтобы предотвратить возможность такого скрытого заражения, я использую несложный прием: осуществляя переносы мицелия, я регулярно инокулирую нижнюю сторону агара (Как часто это делать, зависит от способа и времени хранения чашек. Безопаснее всего производить эту операцию каждый раз при переносе мицелия и как минимум с теми чашками, которые используются для переноса на последующие чашки. Вместе с тем, можно пропустить два или три переноса, прежде чем вы заметите какое-либо влияние на их успешное завершение). Я выполняю инокуляцию нижней стороны агара следующим образом:

1. Переворачиваю чашку вверх дном

2. Приподнимаю одну сторону малой чашки, как будто она скреплена шарниром с большой чашкой, и, с помощью простерилизованного на пламени скальпеля аккуратно отделяю через образовавшуюся щель агаровый диск, чтобы он переместился на большую чашку (если агар рвется или ломается на этом этапе, увеличьте его количество при подготовке среды.

3. Опускаю малую чашку на место, а затем, по мере готовности, переношу кусочек мицелия на открытую нижнюю сторону агара при помощи стерилизованного на пламени и охлажденного скальпеля.

4. В заключение, после инокуляции нижней стороны агара, закрываю чашку, переворачиваю ее и аккуратно, приподняв большую чашку, через образовавшуюся щель при помощи стерилизованного на пламени скальпеля возвращаю агаровый диск на место, т. е. на дно малой чашки. Агаровый диск теперь покрывает кусочек мицелия.

Эта манипуляция заставляет мицелий прорастать с нижней стороны агара сквозь среду на поверхность агарового диска, оставляя в процессе роста все источники заражения позади себя. Некоторые штаммы могут плохо реагировать на подобную методику, но у меня с этим пока что не было никаких проблем, потому что штаммы, которые я использовал, росли на среде весьма активно.

Вместе с тем, такая процедура заметно повышает риск заражения, по сравнению с простыми переносами, что связано с вовлечением в процесс дополнительных манипуляций. В то время, как я редко вижу заражения на агаровых чашках, инокулированных обычным способом (если среда достаточно свежая), при инокуляции нижней поверхности агара заражению подвергается примерно каждая пятая чашка.

Протирание поверхности стола и ваших пальцев спиртом перед началом работы поможет снизить число неудач.

В рассмотренной процедуре есть один не очень простой, но очень важный момент. При инокуляции нижней части агарового диска следует избегать соскребания частиц агара кромкой малой чашки, когда вы закрываете ее после завершения переноса. На частицах агара, которые попадают на кромку или внешнюю сторону малой чашки, часто начинают свой рост вредные микроорганизмы, что связано с близостью окружающего воздуха. По этой же причине я советую использовать чашки, подсушенные должным образом, когда на их поверхности отсутствуют видимые капли воды. Если агаровый диск при перемещении из малой чашки в большую является слишком влажным, то после обратного перемещения на большой чашке может остаться достаточно агара, чтобы привести к последующему заражению на кромках.

И заключительный совет: при извлечении агаровых клиньев из чашки, инокулированной на нижней поверхности агарового диска, не режьте агар на всю глубину. В противном случае, сама идея процедуры, с помощью которой мы пытаемся оставить скрытые источники заражения на нижней части агара, теряет смысл. Для того, чтобы не переносить заражение вместе с чистой культурой, следует вырезать клинья только из поверхностной части агарового диска.

После того, как чашки инокулированы (я держу по 4 чашки каждого штамма), я перемещаю их внутрь новых пластиковых пищевых пакетов, верх которых завязываю узлом. Закрытый пакет обеспечивает неподвижность воздушной среды и предохраняет чашки от мародерствующих грибных комариков и клещей. В один пакет я помещаю три или четыре чашки петри. После этого их можно поместить на инкубацию в подходящее место: на книжную полку, в шкаф, на стол и т. п. Тем не менее, я не рекомендую хранить чашки в холодильнике из-за проблем с конденсацией, равно как и на полке над обогревателем, потому что циклическое нагревание и охлаждение может вызвать попадание микроорганизмов внутрь чашек.

Возможность хранения свежих (не инокулированных) чашек в обычных условиях является одним из преимуществ перекисного метода. Я держу набор свежих чашек в прохладном месте (повторюсь — не в холодильнике). Как и в случае с инокулированными чашками, я храню их в пищевых пластиковых пакетах. Каждый раз, когда я использую какую-либо культуру для инокуляции посевного субстрата, я также беру одну из свежих чашек и инокулирую ее взамен использованной. На этом же этапе я удаляю культуры, на которых имеются признаки заражения плесенью по кромке. Таким образом, количество чашек с растущим мицелием остается постоянным и я редко сталкиваюсь с проблемой нехватки культур.

Производство посевного мицелия является второй стадией в процессе выращивания грибов. Посевной мицелий — это «стартер», используемый для инокуляции основного субстрата или для получения дополнительного посевного мицелия. По сложившейся традиции, изготовление посевного мицелия всегда оставалось прерогативой коммерческих производителей, имеющих стерильные условия для обеспечения защиты мицелия от заражений. Тем не менее, при использовании перекисного метода производство посевного мицелия становится просто еще одним шагом в процессе выращивания грибов, причем не самым сложным.

Возможность производить собственный посевной мицелий в нестерильных условиях приносит заметную экономическую выгоду для мелкомасштабного или домашнего грибоводства. Покупка мицелия по цене от $20 до $25 за пару килограммов приводит к заметным расходам. Если вы производите ту же самую пару килограммов самостоятельно с использованием перекиси, то зерно обойдется вам в один или два доллара, а перекись — в 10 центов (опилки стоят еще дешевле, если вообще не бесплатно). К тому же, вам не придется тратить деньги на такие сомнительные вещи, как оборудование ламинарных боксов или стерильных помещений для инкубации посевного мицелия.

Занимаясь выращиванием грибов, я практически полностью перешел на использование опилочного посевного мицелия. По моим нынешним методикам опилочный субстрат может быть приготовлен быстрее и проще, чем зерновой, без необходимости замачивания зерна и даже без автоклавирования или стерилизации под давлением (см. ниже). Кроме того, зрелый опилочный мицелий колонизирует опилочный же субстрат быстрее и, как показывает мой опыт, с менее частыми случаями заражения плесенью. Заражения самого посевного мицелия также редки, может быть одна банка на сотню, что связано со случайными заражениями, которые неизбежны при допущении ошибок при работе. Конечно, опилочный мицелий не добавляет столько же питания в основной субстрат как зерно, но эта проблема легко решается путем внесения недостающих питательных веществ прямо в субстрат из других источников, которые не требуют стерилизации под давлением.

При выращивании большинства видов грибов считается более предпочтительным, чтобы инокуляция соломы производилась зерновым мицелием, т. к. зерно обогащает питательную основу субстрата. Это зерно должно быть стерилизовано под давлением. Тем не менее, есть два замечательных вида грибов, которые будут хорошо расти на соломе при использовании опилочного посевного субстрата вместо зернового: Hypsizygus ulmaris (Ильмовый устричный гриб) и Hypsizygus tessulatus (Шимеи). В связи с тем, что Н. ulmaris растет еще проще, чем традиционная вешенка семейства Pleurotus и обладает заметно лучшими вкусовыми качествами, на мой взгляд нет никаких причин навлекать на себя дополнительные трудности с использованием зернового мицелия только ради выращивания вешенок на соломе.

Субстрат-«десятиминутка».

Моя методика приготовления опилочного субстрата первоначально включала в себя отдельную стерилизацию достаточного количества воды, которая после растворения в ней перекиси добавлялась в стерилизованные и охлажденные опилки. Эта процедура оказалась, мягко говоря, не совсем удобной, поэтому я задумался об альтернативном методе. Мои поиски привели к разработке субстрата-«десятиминутки» — разновидности опилочно-целлюлозного субстрата, который требует всего лишь 10-минутной обработки паром, безо всякой стерилизации в скороварке. Этот метод, возможно, является самым быстрым из существующих методов приготовления опилочных субстратов. Суть метода, выполняемого за один прием, заключается в следующем: сперва в банку помещаются все твердые ингредиенты, затем добавляется перекись с необходимым количеством воды, а затем субстрат подвергается непродолжительной обработке паром и охлаждается. Очевидно, что после обработки паром в субстрате все еще остается достаточное количество уцелевшей перекиси, который и защищает субстрат от заражений.

Вот рецепт для приготовления субстрата-«десятиминутки»:

Поместите в 800-граммовую банку гранулированные опилки (обычные опилки НЕ ПОДОЙДУТ), гранулированную бумагу (подстилка для животных Crown ТМ или кошачья подсыпка Good Mews ТМ), известь, гипс (необязательно) и азотную добавку (см. ниже). Древесные гранулы должны быть сделаны из относительно легких пород древесины, например тополя или ели, — такие гранулы легче распадаются, быстрее нагреваются и охлаждаются. Вместо известняка можно использовать свежеразмолотые ракушки.

1. Добавьте в банку горячую воду с перекисью и слегка перемешайте.

2. Подождите несколько минут, чтобы жидкость впиталась в опилки и древесные гранулы полностью распались, закройте банку временной крышкой, перетрясите ингредиенты, а затем, постукивая банкой о не слишком твердую поверхность, стряхните субстрат с верхней части банки и добейтесь некоторого его уплотнения внизу.

3. Слегка увлажните картонный диск в основной крышке и установите ее на банку, но не закрывайте слишком плотно.

4. Поместите банки на решетку в кастрюле. Решетка позволяет приподнять банки на некоторую высоту от дна кастрюли. В кастрюлю налейте воды на два-три сантиметра, закройте ее подходящей крышкой, дождитесь закипания воды и выдержите банки над кипящей водой в течение 10 минут. Обычно я наливаю в кастрюлю горячую воду из-под крана, чтобы закипание началось быстрее.

5. По истечении 10 минут извлеките банки из кастрюли и дайте им быстро остыть при комнатной температуре.

6. Смочите картонный диск в крышке 3 %-й перекисью водорода, наливая раствор прямо в крышку и разгоняя его по картону покачивающими движениями. Остатки раствора слейте.

7. Субстрат готов к инокуляции.

В описанной выше процедуре я смешиваю одну часть опилок с примерно двумя частями гранулированной бумаги. Бумажные гранулы облегчают перетряхивание субстрата, т. к. после освоения мицелием, его сросшиеся участки при перетряхивании требуют разламывания на отдельные части. Безусловно, субстрат может быть приготовлен в термостойких пластиковых пакетах и тогда добавления бумажных гранул не потребуется, т. к. субстрат можно будет легко разламывать через пакет.

Агар сам по себе колонизирует опилки с трудом, поэтому я добавляю к опилкам дополнительный источник азота. По стандартной рецептуре в качестве добавки используются отруби: одна часть отрубей на четыре части опилок. К сожалению, при использовании «сырых» добавок типа отрубей, необходимо стерилизовать субстрат под давлением, чтобы уничтожить ферменты, разрушающие перекись. Поэтому мне пришлось подобрать несколько разновидностей азотных добавок, которые не требовали бы стерилизации в скороварке.

Два самых доступных варианта — это соевое или коровье сухое молоко. Я успешно опробовал оба варианта в рамках рассмотренного 10-минутного рецепта, добавляя к указанному количеству опилочных и бумажных гранул по неполной столовой ложке сухого молока.

Sylvan Corporation предлагает к продаже две разновидности переработанных добавок, одна из которых основана на денатурированном соевом протеине (Millichamp 3000), а другая — на кукурузной клейковине (CG60). Обе добавки оказались вполне пригодными (я добавлял их по неполной столовой ложке в субстрат-«десятиминутку»). Ни одна из этих добавок не разлагает перекись при непосредственном добавлении в субстрат, хотя выпускавшийся ранее Millichamp 3000 и еще одна добавка от Sylvan — CS36, - приводят к разложению перекиси. (В Российских магазинах можно без труда найти сухие сливки на основе соевого протеина или кукурузной клейковины).

Искусственные удобрения тоже могут послужить источником азота (например, в указанный выше рецепт можно с успехом добавить примерно 10 г удобрения 20-30-20, марки "Schultz Instant"). Я с успехом использовал такое удобрение при выращивании грибов P. eryngii и Н. ulmarius. Тем не менее, должен вас предупредить, что грибному мицелию потребуется некоторое время на адаптацию к подобным химикатам, поэтому его первоначальный рост будет довольно медленным.

Возможно, вам не понравится сама мысль об использовании искусственных удобрений. Что ж, в качестве органической добавки вместо искусственных удобрений можно использовать человеческую мочу, поскольку она тоже содержит азот, преимущественно в виде мочевины. В этом случае можно примерно половину требуемой воды заменить на свежую урину.

Для того чтобы рассчитать необходимое количество азота в субстрате при использовании других добавок, можно ориентироваться на значение 0.4 % от массы субстрата для искусственных удобрений или 2.5 % от массы субстрата для белковых добавок. Более подробно об этих расчетах см. в разделе о добавках при подготовке основного субстрата.

В заключение отмечу еще два момента, относящихся к приготовлению субстрата-«десятиминутки»:

Во-первых, следите за тем, чтобы все контейнеры и инструменты были чистыми; используемая вода также должна быть чистой и не должна содержать каких-либо посторонних частиц. Если вы работаете на кухне, следите за тем, чтобы никакие органические ингредиенты типа муки или хлебных крошек не попадали в банки или контейнеры, которые вы используете для отмера или взвешивания компонентов субстрата. Проверьте, чтобы ни один из ингредиентов (включая картонные диски для крышки) не имел даже малейших признаков испорченности, иначе в субстрат попадут живые микроорганизмы, которые содержат ферменты, перекись. Рассмотренный нами метод работает именно по той причине, что ни один из ингредиентов не содержит разрушающих ферментов, поэтому вам нужно быть уверенными, что это условие соблюдается и в вашем случае.

Во-вторых, рассмотренная методика работает еще и потому, что количество материалов, помещаемых в 800-граммовую банку, является незначительным. Такое количество субстрата может быть нагрето и остужено за короткое время, поэтому некоторая часть перекиси остается нетронутой и после паровой обработки. Большее количество субстрата потребует более длительного нагрева и будет дольше остывать, поэтому в этом случае, скорее всего, придется добавлять большее количество перекиси, чтобы хоть какая-то его часть гарантированно уцелела. При необходимости вы сможете экспериментальным путем определить необходимое количество добавляемой перекиси.

Субстрат на основе опилок, стерилизованных под давлением

Если вы не хотите использовать опилочные гранулы в качестве источника опилок или желаете использовать необработанную азотную добавку типа отрубей, вам придется стерилизовать субстрат под давлением и добавить раствор перекиси после остывания среды. Вам нужно будет простерилизовать отдельно достаточное количество воды, чтобы растворить перекись в одной третьей или в половине общего объема воды, добавляемой к субстрату. После отмеривания необходимого количества раствора перекиси, вылейте его в субстрат и затем хорошо перетрясите, чтобы равномерно распределить жидкость.

Вот описание процесса, который я раньше использовал:

1. Добавьте примерно половину воды, необходимой для приготовления субстрата, во все контейнеры, которые вы хотите приготовить

2. Отмерьте и простерилизуйте достаточное количество воды, которую вы позже будете добавлять в каждый контейнер в качестве второй половины жидкости вместе с перекисью.

3. После охлаждения стерилизованной воды, добавьте в нее перекись, чтобы получить раствор 1:10 (т. е. добавьте 3 % перекись в количестве, примерно равном 1/10 общего объема воды)

4. Отмерьте индивидуальное для каждого контейнера количество воды с помощью мерного цилиндра, пастеризованного при помощи кипящей воды.

5. Вылейте отмеренное количество воды в каждый контейнер с субстратом (получим дополнительное разбавление 1/2, т. к. контейнеры уже содержат половину воды), следя за тем, чтобы капли воды, стекающие по внешней поверхности цилиндра, не попадали в субстрат (капли следует вытирать) и немедленно перемешайте содержимое контейнера.

Отношение вода/раствор перекиси станет примерно 1/20, что примерно соответствует концентрации перекиси 0.15 %, т. е. такой же, как и для зернового субстрата.

Если вы решили, что вам нужен зерновой субстрат, я должен предупредить вас (особенно если вы никогда не делали зерновой субстрат раньше), что его приготовление может оказаться трудным даже при добавлении перекиси. Причина заключается в том, что зерно, продаваемое в магазинах может содержать большое количество эндогенных источников заражения, которые непросто уничтожить посредством стерилизации под давлением.

Иными словами, не смотря на то, что я применял длительную стерилизацию под давлением и использовал значительные количества перекиси, мне так и не удалось достичь стабильных, без заражений, результатов на зерне ржи, которое я приобретал в местном магазине.

К счастью, у меня была возможность использовать другое зерно, называемое мягкой белой пшеницей. Оно имеет гораздо большую первоначальную влажность, чем рожь (30 % против 8 % у ржи), но вместе с тем, выглядит значительно чище.

Хорошие результаты с мягкой белой пшеницей были достигнуты тогда, когда перед стерилизацией в скороварке я замачивал это зерно на ночь в определенном количестве горячей воды из-под крана, или же когда я замачивал зерно в избытке горячей воды. Субстрат, свободный от заражения, получался каждый раз, когда я использовал этот вид зерна.

К сожалению, мягкая белая пшеница не всегда бывает в продаже, а кроме того, к ней нередко подмешивают твердые коричневые сорта пшеницы, т. е. зерно низкой влажности, с которым случаются те же проблемы, что и с рожью.

Какое бы зерно вы ни выбрали, удостоверьтесь в следующем:

1. Субстрат полностью стерилизован перед добавлением перекиси.

2. Удалены все следы субстрата (питательной среды) с внешней поверхности контейнера.

Безусловно, проблема тщательной стерилизации существует и в случае приготовления субстрата в среде с фильтрованной атмосферой. Если споры плесени или бактерии находятся внутри зерен (в сердцевине) или в других частицах, составляющих субстрат, и они не были уничтожены путем автоклавирования или обработки в скороварке, то они могут прорасти и испортить субстрат вне зависимости от наличия фильтрованной атмосферы или добавленной перекиси. Неполная стерилизация означает также, что в зерне остается некоторое количество перекисеразрушающих ферментов, что приводит к появлению в субстрате областей, не защищенных перекисью.

Вторая проблема существует и в обычной практике культивирования. Если следы питательной среды попадают на внешнюю поверхность контейнера, это место впоследствии может стать центром заражения и распространения спор. Если такое случается с субстратом, который защищен перекисью, то культура может оставаться чистой до тех пор, пока не произведено ее перетряхивание для распределения мицелия. Но через несколько дней заражение станет более чем явным, т. к. микроорганизмы воспользуются недостатком перекисной защиты в новых многочисленных местах роста мицелия. Эту проблему можно предотвратить, тщательно очищая контейнеры изнутри и снаружи перед использованием и протирая внешнюю поверхность контейнеров спиртом после проведения инокуляции субстрата.

Вот как я делаю субстрат из мягкой белой пшеницы.

1. Помещаю 200 мл зерна в 800 гр банку.

2. Добавляю с избытком горячую воду из-под крана плюс небольшое количество питьевой соды, чтобы скорректировать кислотность воды.

3. Замачиваю зерно при температуре, близкой к кипению воды, в течение часа или двух, чтобы насытить водой сердцевину зерна, когда зерно увеличится в объеме примерно вдвое, я сливаю лишнюю воду.

4. В заключение, я стерилизую банку в зерном в скороварке в течение часа. Точное время стерилизации зависит от зерна и скороварки.

5. После охлаждения банки я добавляю 10 мл 3 % перекиси (или 20 мл перекиси на каждые 0.5 л первоначально взятого зерна), а затем хорошо перетряхиваю банку, чтобы перекись покрыла зерна.

Один грибовод добавляет к перекиси краситель, чтобы знать, когда перекись тщательно распределится по зерну. Если зерно заметно слипается, то достичь полного покрытия зерен будет непросто. В этом случае вам придется подобрать количество воды и не замачивать зерно в течение слишком долгого времени.

Окончательная концентрация перекиси является высокой, примерно 0.15 %, но грибной мицелий при этом растет хорошо, может быть только немного медленнее, чем без добавления перекиси (если вы готовите субстрат, добавляя отмеренное количество воды, то для достижения правильной влажности содержимого не забывайте вычитать из количества добавляемой воды объем перекиси).

В принципе, вы можете добавлять и меньшее количество перекиси, но если вы добавите меньше, чем 20 мл 3 % раствора на каждые 0.5 л зерна, вам скорее всего, придется перед добавлением разбавить перекись в большем объеме стерильной воды, чтобы обеспечить надежное покрытие зерна этим раствором. С другой стороны, в большинстве случаев вы можете добавлять до 40 мл перекиси без серьезного влияния на рост мицелия.

Я выращиваю мицелий в 800 г банках из-под соуса, потому что мне легче их достать. У этих банок крышки заворачиваются по резьбе. Литровые банки для консервирования тоже подойдут, особенно если у них есть резьбовые крышки, но крышки с внешним фиксатором тоже подойдут, если вы поместите внутрь их картонный диск несколько большего, чем надо, размера, чтобы обеспечить нужную высоту крышки для правильной фиксации.

Обязательно проверьте внутреннюю поверхность крышки на чистоту перед каждым использованием (это относится и к резьбе на банке). Следы старого субстрата на горле банки или внутри крышки могут вызвать большие проблемы. Пятна ржавчины на внутренней стороне крышек также могут удерживать частицы субстрата и обеспечивать условия для роста микробов.

Замечу, что добавление перекиси делает необязательным установку на крышках микропористых фильтров, как этого требуют традиционные методы. Тем не менее, крышки на банках являются уязвимым местом, даже при добавлении к среде перекиси, потому что вам придется перетряхивать банки для распределения мицелия, а при перетряхивании споры, которые диффундировали на внутреннюю поверхность крышки из воздуха (или фрагменты плесени, которые выросли в микроуглублениях на плохо отмытой крышке) могут войти в контакт с мицелием, который сам по себе не защищен. Чтобы исправить этот недостаток, присущий крышкам, я делаю следующее:

1. Приготовляю набор тонких картонных дисков, вырезанных по внутреннему размеру крышек (хорошо подходит картон от какой-нибудь коробки; просто очертите крышку на картоне при помощи ручки, а затем вырежьте по внутренней стороне круга, слегка к центру от линии).

2. В случае с субстратом-«десятиминуткой», я смешиваю ингредиенты, используя отдельную крышку, а затем, перед обработкой паром, устанавливаю крышки с картонными дисками на место.

3. После охлаждения субстрата я открываю крышки и смешиваю картонные диски 3 % раствором перекиси, наливая его в крышки слоем в 1–2 мм. Увлажненные перекисью крышки формируют затем барьер для источников заражения, находящихся в воздухе.

В случае с зерном или другим субстратом, требующим стерилизации, я заворачиваю крышки с картонными дисками в алюминиевую фольгу и стерилизую их отдельно от банок с субстратом, которые на время стерилизации закрыты отдельными крышками. Затем, после добавления перекиси в стерилизованный субстрат и распределения путем перетряхивания, я снимаю временные крышки и устанавливаю на место стерильные крышки с картонными дисками. После этого, я увлажняю диски 3 % раствором перекиси.

Стерильные контейнеры с субстратом могут быть инокулированы двумя способами. Вы можете вырезать кусочки мицелия из агаровой культуры с помощью стерильного скальпеля и бросить их в контейнеры (Если вы изберете этот метод, то сперва встряхните банку или пакет, чтобы субстрат пересыпался на одну сторону. Таким образом вы можете поместить кусочек мицелия вглубь субстрата, но он при этом окажется у стенки контейнера и за ним можно будет наблюдать). Или вы можете перетрясти контейнер после добавления мицелия. Я предпочитаю не перетряхивать контейнер — это часто заканчивается тем, что кусочки агара прилипают к стенке в месте над субстратом. Это место не защищено перекисью, а стряхнуть агар посредством дальнейшего встряхивания банки затруднительно. К тому же, перетряхивание субстрата с перекисью не дает очевидных преимуществ. Небольшие фрагменты мицелия, которые отделяются при перетряхивании, вероятно, слишком малы для того, чтобы эффективно адаптироваться и продолжить свой рост в присутствии перекиси, концентрация которого при использовании в посевном субстрате достаточно велика. Поэтому я бросаю кусочки агара (для медленно растущих штаммов — по три кусочка) вглубь субстрата и закрываю контейнер. В случае с опилочным субстратом для Н. erinaceus я дополнительно уплотняю субстрат, постукивая банкой о стол, чтобы субстрат охватил кусочки агара, потому что этот вид, похоже, предпочитает субстрат плотной, утрясенной консистенции.

Заметьте, что для инокуляции субстрата с перекисью следует использовать только адаптированный к перекиси мицелий, т. е. мицелий, выращенный на перекисесодержащем агаре. В противном случае, не адаптированный мицелий может погибнуть, или же для начала его роста потребуется слишком много времени, т. к. мицелий столкнется с перекисью в относительно высокой концентрации, которая обусловлена предлагаемой рецептурой для посевного субстрата. Вместе с тем, основной субстрат с перекисью содержит последнюю в гораздо меньшей концентрации и поэтому может быть безопасно инокулирован посевным мицелием, не адаптированным к перекиси.

Первоначально я помещал банки после инокуляции в свежие пластиковые пакеты, завязывая их на узел (я делал это немедленно после протирания банок спиртом). Я использовал пластиковые пакеты для того, чтобы обеспечить неподвижность окружающего банки воздуха и уберечь банки от приблудившихся грибных комариков (пакеты можно использовать повторно, если они не загрязнены). Позже я стал помещать банки на инкубацию без пакетов и это не оказало на конечный результат никакого отрицательного влияния.

В заключение я удостоверяюсь, что банки закрыты должным образом и оставляю их на несколько дней, пока мицелий не начнет осваивать окружающее пространство. Разлагающаяся перекись обеспечивает мицелий кислородом, поддерживая его рост на этом этапе, а уровень углекислого газа в это время еще не слишком высок. Когда ореол мицелия достигает сантиметра в поперечнике, я перетряхиваю субстрат. Через несколько дней в субстрате появляется множество новых точек роста (не затягивайте слишком с перетряхиванием субстрата, т. к. вместе с ростом ореола мицелия вокруг кусочка агара, количество перекиси, защищающего субстрат, постоянно уменьшается). Раньше я ослаблял крышку на банке после перетряхивания, чтобы обеспечить некоторый газообмен, но сейчас я считаю, что в этом нет необходимости. Картонный диск, очевидно, обеспечивает газообмен в достаточной степени, даже если крышка плотно закрыта.

Посевной мицелий готов к использованию, если он не очень плотно, но полностью освоил всю массу субстрата. Я обычно жду, когда мицелий начнет расти над поверхностью субстрата (на полсантиметра или более) и только после этого использую содержимое банки для инокуляции.

Если вы используете не банки, а пакеты с субстратом, порядок действий остается в основном тем же. Вам не нужно беспокоиться о попадании контаминантов в охлажденные пакеты, так как любые микроорганизмы, попавшие внутрь, будут уничтожены перекисью.

Что я думаю об использовании перекиси для приготовления жидких культур? Я не рассматривал такую возможность по двум причинам. Во-первых, любой метод инокуляции жидкой среды подразумевает перемешивание прививочного материала (или, в некоторых других способах, разламывание мицелия), что высвобождает в процессе инокуляции заметное количество перекисеразрушающих ферментов, попадающих в среду. Во-вторых, даже если предположить, что с первой проблемой можно справиться, я предвижу быстрое снижение концентрации перекиси в жидкой среде, потому что в ней будет циркулировать нетронутый грибной материал, содержащий внутри себя перекисеразрушающие ферменты. На твердых субстратах мицелий осваивает ограниченный участок, а концентрация перекиси на нетронутой среде остается на желаемом уровне. Уменьшение количества перекиси может быть восполнено ее регулярным добавлением, но это может потребовать методики измерения концентрации перекиси в очень разбавленных растворах.

Колонизация основных, плодоносящих субстратов — это третья стадия в процессе грибного культивирования, ведущая напрямую к производству съедобных грибов.

В связи с тем, что раствор перекиси так дешев, экономически выгодным является добавление достаточного количества перекисного раствора в плодоносящие субстраты, чтобы защитить их от заражений. С технической точки зрения это означает, что можно выращивать некоторые виды дереворазрушающих грибов без применения автоклавирования для стерилизации субстрата. С другой стороны, методики, о которых говорится в этом томе, предусматривают использование субстратов, не содержащих перекисеразрушающих ферментов. Перекись не даст заметных преимуществ (или не даст вовсе) на субстратах, которые все еще обладают значительной биологической активностью, таких, как компост, пастеризованная солома или свежие древесные опилки, обработанные в кипящей воде.

Первый материал, который я нашел идеальным для использования с перекисью, был гранулированным топливом для печей, работающих на прессованных опилках. Такой субстрат проходит предварительную термообработку и поэтому не вызывает разложения перекиси даже без автоклавирования. В этой связи, гранулированное топливо может быть легко пастеризовано при помощи кипящей воды для дальнейшего использования в качестве основного субстрата. Добавление воды одновременно обеспечивает необходимую влажность содержимого (когда вы добавляете кипящую воду к опилочным гранулам, они превращаются в опилки, из которых и были первоначально сделаны). Опилочные гранулы из древесины твердых пород являются, в общем случае, наилучшим выбором для большинства дереворазрушающих грибов, хотя гранулы, сделанные из еловых опилок тоже могут подойти (я подозреваю, что тепловая и механическая обработка, используемые при изготовлении гранулированного топлива, могут разрушать некоторые из смол, содержащихся в ели и являющихся ингибиторами роста мицелия). Проверьте, чтобы выбранные гранулированные опилки не содержали каких-либо добавок типа полимерного связующего (в большинстве случаев, добавок нет).

Другой субстрат, который я использовал с перекисью — это гранулированная бумага вторичной переработки. В моей местности такой материал продается как Crown Animal Bedding ТМ (подстилка для животных) и Good Mews ТМ Cat Litter (подсыпка для кошек). Эти продукты проходят двойную санитарную термическую обработку (согласно информации из буклетов). Даже без добавления воды, указанные гранулы имеют начальную влажность около 30 %. Как и в случае с гранулированным топливом, этот материал не содержит остаточных перекисеразрушающих ферментов. Недостатком в данном случае является цена, которая для подстилки для животных обычно в три раза выше, чем для гранулированного топлива, если считать по сухому весу.

Если в вашей части земного шара не удается приобрести гранулированной бумаги или гранулированных опилок, вам стоит обратить внимание на одну из методик приготовления субстрата, представленных во втором томе. Эти методики предусматривают использование в качестве субстрата большого количества доступных материалов, включая и те, которые содержат перекисеразрушающие ферменты. Пожалуй, единственный материал, который НЕ БУДЕТ работать ни с одной из перекисных методик, это сырые, свежие опилки, т. е. опилки, производимые на пилорамах из свежего леса.

Если у вас имеется другой субстрат, который вы хотели бы использовать с перекисью, скажем, бумажные или картонные отходы, и вы планируете пастеризовать его, а не автоклавировать, то вам придется удостовериться в отсутствии перекисеразрушающих ферментов в субстрате после пастеризации. Для проверки вы можете просто поместить небольшое количество субстрата в чашку и добавить некоторое количество 3 % раствора перекиси. Если сразу после этого ничего не произойдет, подождите в течение некоторого времени. Если в субстрате присутствуют перекисеразрушающие ферменты, смесь начнет пузыриться и пениться. Если все ферменты уничтожены, смесь не будет отличаться от субстрата, смешанного с во-

Состав плодоносящих субстратов может отличаться от одного вида гриба к другому. Большинство рецептов для дереворазрушающих грибов включают опилки (которые мы будем получать из гранулированного топлива), как минимум 1 % молотой извести, воду в количестве, обеспечивающем окончательную влажность в районе 60–65 %, и 5-20 % (по сухому весу) какой-либо добавки в качестве источника азота, например, рисовых отрубей (они обеспечивают общий уровень азота в пределах 0.1–0.4 %).

Более высокие уровни азота в обогащенных опилках обычно позволяют повысить урожайность грибов, но вместе с тем, традиционно считается, что высокий уровень азота повышает и риск заражения. При использовании перекиси, опасность заражения, вследствие повышении уровня азота, может и не возрастать заметным образом. Тем не менее, чтобы не искушать судьбу, я редко увеличиваю уровень азота выше значения 0.4 %.

Древесные щепки и плотность субстрата

Традиционные рецепты часто подразумевают добавление древесных щепок, но я никогда не включаю их в состав своих субстратов, потому что это потребовало бы отдельной стерилизации щепок под давлением перед смешиванием с основным пастеризованным субстратом, а это неудобно. Некоторые грибоводы убеждены в том, что наличие древесной щепы является критичным фактором при выращивании шиитаке. Я никогда не считал их наличие необходимым для грибов Н. ulmarius, P. eryngii или Н. erynaceus, но я также выяснил, что определенные преимущества приносит аккуратное, но плотное сжатие опилок в пакете после инокуляции (сжимать нужно руками, через пакет, чтобы вытеснился свободный воздух, но не имеющаяся в субстрате вода). Более плотный субстрат, получившийся в ходе такой манипуляции, в какой-то мере послужит тем же целям, что и добавление щепок. Нетрудно представить, что гриб, подобный Н. erinaceus, который с радостью осваивает такую твердую древесину, как орех или вишня, может предпочитать плотные субстраты и поэтому будет лучше чувствовать себя на сжатых, а не рыхлых опилках. Согласно традиционным рецептам, без добавления к опилкам перекиси, уплотнять субстрат не рекомендуется, потому что это создает опасность образования анаэробных условий, которые благоприятны для вредоносных организмов. Тем не менее, если в субстрате присутствует перекись, ее разложение обеспечивает необходимый уровень кислорода даже в уплотненном субстрате, делая, таким образом, возможным выращивание некоторых видов грибов на уплотненном субстрате без опасности анаэробного заражения.

Приготовление опилочного субстрата с питательными добавками и перекисью

Итак, вот что мы будем делать с гранулированными опилками:

1. Возьмите контейнер, например 8-литровое пластиковое ведро с плотно закрывающейся крышкой, и тщательно вымойте его (я мою внутреннюю поверхность ведра при помощи губки, используя биоразлагаемое моющее средство для посуды, а затем ополаскиваю его).

2. Ополосните контейнер и его крышку кипящей водой — одного чайника будет достаточно. Начиная с этого момента, избегайте прикосновений к внутренней поверхности ведра или к его ободку.

3. Поставьте прикрытое крышкой ведро на весы и насыпьте в него примерно 3.5 кг (по сухому весу) гранул из дубовых опилок или 2.5–3 кг гранул из легкой древесины типа ели (2.5 кг — это примерно 3.7 л гранул, если вы предпочитаете измерять их количество объемом. Я использую литровую стеклянную кастрюльку, которую пастеризую перед использованием, прокипятив в ней немного воды, хотя это и не обязательно). Вам, вероятно, придется сделать собственные измерения, ориентируясь на приобретенные гранулы, но в любом случае, опилки, полученные из этого количества гранул, должны помещаться в ведро вместе с посевным мицелием и добавками, а оставшегося свободного места должно быть достаточно для тщательного перемешивания ингредиентов.

4. Если вы используете в качестве сухой добавки денатурированный источник азота типа CG 60 или Millichamp 3000 от фирмы Sylvan, его можно добавить к гранулам уже на этой стадии.

5. Добавьте к опилочным гранулам известь. Я использую ракушечный помол, но перед использованием прогреваю его при температуре 200 °C в течение двух часов, чтобы уничтожить какие бы ни было перекисеразрушающие ферменты, появляющиеся на ракушках вследствие бактериального роста. Молотый известняк, если вы его найдете, тоже является хорошим выбором. Не используйте доломитовую известь, которая содержит соли магния, являющиеся ингибитором роста мицелия. Для грибов, растущих на дубовых опилках, я добавляю 60–80 г извести, а в случае использования легких опилок, таких как еловые или тополиные, вдвое меньше.

6. Вскипятите в закрытом чайнике половину количества воды, которую вы будете добавлять к гранулам (используемая вода должна быть чистой и не должна содержать видимых частиц. В некоторых случаях может потребоваться фильтрование). На этом этапе я кипячу примерно 3.5 л воды для 4 кг гранул из дубовых опилок (если вы используете растворимую добавку, например, искусственное удобрение, ее можно добавить в воду перед кипячением). Гранулы из еловых опилок менее плотные, поэтому их я беру только 2.7 кг и кипячу для них 3 л воды. Вы можете поэкспериментировать с количеством добавляемой воды в зависимости от вида выращиваемых грибов. Одним из преимуществ использования перекиси в субстрате является то, что вы можете добавить большее количество воды и при этом все равно не будет риска образования анаэробных областей, которые могли бы привести к заражению (вместе с тем, опилки, полученные из гранул, имеют тенденцию к слипанию при избытке воды, поэтому их в последствии будет трудно поместить в пакеты, не рассыпав).

7. Через минуту после закипания воды, снимите крышку с ведра, поставьте ее на ребро и залейте субстрат кипятком. Закройте ведро и перемешайте субстрат, переворачивая ведро в течение пары минут, чтобы распределить воду.

8. Вскипятите в отдельном закрытом чайнике вторую половину воды, которую вы собираетесь добавить, выключите плиту и уберите чайник, оставив его остывать с закрытой крышкой. Эта вода будет впоследствии использована для добавления перекиси.

9. Оставьте закрытое ведро с субстратом остывать, на что обычно требуется несколько часов. Ко времени добавления перекиси дно ведра может быть достаточно горячим на ощупь.

1. Обдайте кипятком мерный стакан и добавьте половину стакана 3 % раствора перекиси к имеющемуся чайнику прохладной кипяченой воды

2. Вылейте раствор перекиси в охлажденное ведро с субстратом и тщательно перемешайте, переворачивая ведро. Окончательная концентрация перекиси должна быть примерно 0.03 %, или 1/100 от первоначальной.

3. Дайте субстрату окончательно остыть при комнатной температуре, после чего он готов к использованию.

Возможно, вас интересует вопрос о том, нельзя ли сделать рассмотренную процедуру более простой, как это было с методикой для субстрата-«десятиминутки». Если поднять концентрацию перекиси для того, чтобы компенсировать ее разложение в горячем субстрате, то она, возможно, могла бы быть добавлена в самом начале процедуры вместе с необходимым количеством воды. Это было бы возможно при обеспечении высокой начальной концентрации перекиси. Однако, после добавления всей воды в виде кипятка, на остывание субстрата потребовалось бы в два раза больше времени. В этом случае, я думаю, для перекиси наступили бы нелегкие времена и она едва ли выжила бы при высокой температуре, даже если ее первоначальная концентрация была бы в несколько раз выше.

Азотные добавки к основному субстрату

Если вы используете традиционные азотные добавки, типа проса или рисовых отрубей, вам придется подвергнуть их автоклавированию. Стерилизованные добавки вносят в охлаждаемый пастеризованный субстрат в еще горячем состоянии. Перед высыпанием добавки из банки не забывайте протирать ее внешнюю сторону.

Большинство традиционных азотных добавок для грибной культуры требуют стерилизации под давлением для уничтожения эндогенных перекисеразрушающих ферментов еще до пастеризации субстрата (эти ферменты являются достаточно стабильными и стандартная процедура пастеризации не является достаточной для их дезактивации, даже при использовании таких «нежных» добавок, как рисовые отруби). Тем не менее, как я уже отмечал в главе о приготовлении опилочного субстрата, мной были найдены несколько добавок, которые не содержат ферментов и поэтому могут быть добавлены к опилочным гранулам без стерилизации. Две азотные добавки — Millichamp 3000 и CG 60 от фирмы Sylvan, — производятся в промышленных масштабах и уже используются в производстве шампиньонов. Они содержат денатурированный соевый протеин и кукурузную клейковину соответственно, и процесс денатурации, очевидно, уничтожает перекисеразрушающие ферменты. Достоинство этих добавок трудно переоценить, но для домашнего грибовода может оказаться затруднительным их приобретение. Кроме того, нужно следить за тем, чтобы эти добавки не испортились во время хранения, особенно это относится к Millichamp 3000.

По более высокой цене, но и с меньшими проблемами, можно приобрести другие разновидности переработанного протеина, например текстурированный овощной протеин или сухое молоко, соевое либо коровье.

Другим видом добавки, используемой без стерилизации, является обычное химическое удобрение, например стандартной марки 20-20-20. В связи с тем, что такие удобрения производят не из живых организмов, они не содержат перекисеразрушающих ферментов. Тем не менее, после некоторого периода адаптации, питательные вещества из этих удобрений могут быть почти полностью усвоены грибным мицелием. Если вы хотите попробовать этот способ подпитки, я рекомендую добавлять удобрения уже во время приготовления опилочного посевного субстрата, чтобы адаптационный период для мицелия закончился еще до его внесения в основной субстрат. К тому же, у вас будет шанс увидеть, как выбранное удобрение влияет на конкретный вид гриба, который вы выращиваете. Формулы удобрений могут несколько отличаться, даже при одинаковом значении отношения NPK (т. е. азот-фосфор-калий), поэтому есть смысл предварительно проверить выбранное удобрение на небольшом количестве культуры, прежде чем добавлять его в основной субстрат.

Обычным азотсодержащим компонентом химических удобрений является мочевина, поэтому не исключено, что она сама по себе может быть использована в качестве добавки, не требующей стерилизации под давлением.

Если вам хочется использовать что-нибудь более «органическое», чем искусственные удобрения (для этого есть веские аргументы, например, чтобы не зависеть от субстанций, для производства которых требуются нефтепродукты), в качестве добавок, не требующих автоклавирования может быть использована моча, человеческая или от животных. Тем не менее, перед применением она должна содержать относительно малое количество микроорганизмов. Один из способов достичь этого — добавить перекись водорода.

Расчет необходимого количества добавок

Каким образом можно рассчитать количество той или иной добавки? Вычисления могут быть только приблизительными, а окончательное, оптимальное решение может быть сделано на основе урожайности грибов при различных уровнях обогащения субстрата. Один из способов расчета может быть основан на приложении к книге Стэйметса «Выращивание деликатесных и медицинских грибов», где в таблице приводятся значения отношения NPK для рисовых отрубей, которое примерно составляет 2–1.3—1. Так, если к субстрату, по рекомендации Стэйметса, обычно добавляют 5-20 % рисовых отрубей, то удобрение 20-20-20, которое содержит в 10 раз больше азота, чем рисовые отруби, должно вноситься в количестве 1/10 от массы отрубей, или в количестве 0.5–2 % от сухого веса субстрата. Если бы вы добавили 0.5 кг отрубей к ведру гранулированных опилок, то при использовании удобрения 20-20-20, вам пришлось бы добавлять его в количестве 1/10, т. е. 50 г. При использовании коммерческих добавок, вам придется узнать у производителя процентное содержание азота в добавке и разделить это число на 2.0, чтобы узнать, какую долю добавки следует вносить по сравнению с количеством рисовых отрубей. Например, добавка Millichamp 3000, изготавливаемая из сои, содержит примерно 7.3 % азота, поэтому ее следует вносить в количестве примерно 1/4 от веса рисовых отрубей.

Количество добавки, обеспечивающее окончательное значение содержания азота в субстрате в пределах 0.1–0.4 %, можно вычислить и непосредственно, не прибегая к методике Стэйметса, основанной на количестве рисовых отрубей:

1. Разделите процентное значение количества азота в добавке на окончательное желаемое процентное значение в субстрате.

2. Разделите полученное число на общий вес субстрата, подлежащего обогащению, чтобы получить вес добавки, которую нужно будет внести в субстрат.

Иными словами, сколько нужно добавить сухого соевого молока, чтобы получить окончательную концентрацию азота, равной 0.2 % (что требует, в случае применения рисовых отрубей, добавления их в субстрат в количестве примерно 10 % по сухому весу)? Если соевое молоко содержит 7.6 % азота, разделив 7.6 на 0.2 получаем 38. Если общая масса субстрата составляет 3 кг, то нужно добавить 3/38 = 0. 079 кг, или 79 г сухого молока. (В оригинале расчет ведется в фунтах и унциях, что дает точно такой же результат: 6.5 lb / 38 = 0.17 lb, или 2.72 oz, что в переводе на граммы составляет 77 г. прим. Fungiest).

Измерение pH субстрата

Я использую полоски Color Hast, позволяющие измерять pH любой среды или субстрата в пределах от 4 до 10, стараясь в большинстве случаев достичь величины pH, равной 6–7. Полоски Color Hast недороги и удобны в использовании, а трехцветная шкала для сравнения обычно дает показания, которым можно доверять. Вместе с тем, измерение pH среды с добавленной перекисью при помощи индикаторных полосок — это плохая идея, потому что перекись может изменить химический состав индикатора. В случае с агаровыми культурами или посевным субстратом, вы можете легко измерить pH после стерилизации.

При работе с гранулированными опилками используйте небольшой черпак (его следует обдать кипятком), чтобы извлечь из ведра некоторое количество субстрата после добавления и перемешивания кипящей воды с известью. После этого вы можете измерить pH взятого субстрата при помощи цветной индикаторной полоски. Не забывайте, однако, что при добавлении гранулированной извести, которая растворяется очень медленно, показания полосок дадут вам лишь относительное представление о значении pH, в отличие от того, при котором в действительности будет расти мицелий. Добавление гашеной извести (СаОН, продаваемой в строительных магазинах как «известь-пушонка» или «строительная известь», расфасованной в большие мешки) может привести к последующим проблемам, поскольку она растворяется и реагирует гораздо быстрее, а для некоторых видов грибов может быть важным «задержанное» освобождение щелочи, обеспечиваемое гранулированной известью.

Затем вам нужно будет подобрать оптимальное количество извести, ориентируясь на самый лучший урожай грибов.

Контейнеры для субстрата

Традиционно, опилочные культуры выращивают в специальных пластиковых пакетах с микропористыми фильтрами-заплатками, которые обеспечивают газообмен, но не позволяют заражению проникать внутрь. Добавляя перекись в плодоносящий субстрат, вы можете использовать для выращивания грибов обычные мусорные пакеты, экономя на каждом от 50 до 80 центов. Технология изготовления мусорных пакетов, очевидно, приводит к их пастеризации, так что они не содержат заметного количество живых микроорганизмов. Если вы решили использовать пластиковые мусорные пакеты, я рекомендую те их разновидности, которые изготовлены из пленки высокой плотности толщиной 50 микрон или меньше. Такие пакеты достаточно тонки, чтобы обеспечивать диффузию кислорода, поэтому культуры могут быть выращены до зрелого состояния в закрытых пакетах, завязанных на узел. Что касается пакетов из более толстой и мягкой пленки, то для их изготовления, очевидно, применяется поливинилхлорид (ПВХ), который может оставлять в грибной культуре остатки эстрогена и, кроме этого, некоторые разновидности мягких пакетов насыщены фунгицидами.

Если вы не используете традиционные грибоводческие пакеты с боковыми фальцами, вам придется поместить ваши пакеты в подходящие по размерам контейнеры, чтобы придать субстрату форму. Небольшие использованные коробки вместительностью на 2–3 кг субстрата можно найти в магазинах здорового питания или подобных им заведениях. Можно купить пластиковые контейнеры, которые, к примеру, используются для выращивания рассады.

Одноразовые пакеты создают известные проблемы с загрязнением окружающей среды. Альтернативой является использование пластиковых ведер с крышками емкостью 8-12 л, изготовленных преимущественно из полиэтилена высокой плотности. Проще найти ведра на 18–20 л, но они несколько великоваты для средних размеров пакета с опилочной культурой. Такие ведра можно мыть с помощью какого-либо моющего средства и, после ополаскивания кипящей водой, использовать повторно. Если крышки закрывать не очень плотно, для обеспечения газообмена во время роста мицелия, то ведра можно рассматривать как замечательные контейнеры для тех видов грибов, которые плодоносят в вертикальном положении, например для P. eryngii. Н. erinaceus тоже будет расти в ведре, если на время плодоношения открыть ведро и положить его на бок (я наполняю ведро субстратом только на треть или на половину, поэтому верхняя часть ведра обеспечивает барьер для влажности). Грибу Н. ulmarius будет несколько тесно в ведрах, о которых мы говорим, если только не наполнить ведро субстратом почти до верха, чтобы гроздья грибов могли расти над верхним краем ведра. Правда, для получения второй волны плодоношения, придется вынуть круглый блок из ведра и перевернуть его вверх ногами, потому что Н. ulmarius не любит плодоносить дважды с одной и той же поверхности.

Инокуляция опилочного субстрата с добавками

Я приготавливаю посевной мицелий к инокуляции традиционным путем:

1. За день до использования мицелия я разбиваю субстрат, ударяя банкой по твердой поверхности, покрытой каким-нибудь мягким материалом.

2. После разделения субстрата на части я ставлю банку обратно на полку и оставляю ее на ночь для дополнительной инкубации, чтобы мицелий на кусочках субстрата начал новый рост. Эта мера заметно ускоряет дальнейший рост мицелия в новом субстрате. Если я работаю с зерновым субстратом, это также дает шанс увидеть бактериальное заражение в форме «мокрых» или лоснящихся зерен, которые не покрылись новым пухом мицелия. Если посевной субстрат был выращен с добавлением перекиси, присутствие двух или трех влажных зерен, возможно, не повлияет на последующую успешную колонизацию основного субстрата, потому что бактерии, которые способны выжить при воздействии перекиси, обычно имеют довольно доброкачественную природу и присутствуют в небольших количествах. Тем не менее, если в субстрате гораздо больше мокрых зерен, чем два или три, бактерии смогут затормозить колонизацию основного субстрата и это в дальнейшем даст возможность для роста плесени. Поэтому вам, возможно, придется выбросить посевной мицелий, если он содержит заметное количество мокрых зерен.

3. Я произвожу инокуляцию опилок, полученных из гранул, путем непосредственного высыпания в 8-ми литровое ведро предварительно разломанного посевного мицелия. Затем я закрываю крышку и, переворачивая ведро, перемешиваю все содержимое.

4. Рассыпаю смесь по пакетам. Открытые пакеты, готовые к заполнению субстратом, находятся внутри коробок подходящего размера.

5. Когда пакет наполнен до объема, определяемого коробкой, я закрываю крышку на ведре с остатком инокулированного субстрата и, следя за тем, чтобы не касаться внутренней поверхности пакета, слегка перемещаю пакет, чтобы субстрат заполнил все пустоты, если таковые имеются, а затем закручиваю раструб пакета и завязываю его на двойной узел.

6. Наконец, я сжимаю опилки, надавливая на пакет аккуратно, но достаточно сильно. Я заметил, что это ускоряет рост некоторых культур, особенно в случае использования легких опилок, типа ели или тополя.

После наклеивания ярлычка коробка готова к инкубации и с этого момента я следую стандартным методикам грибоводства. Блоки мицелия, полученные в результате инкубации, могут быть использованы непосредственно для плодоношения или же в качестве посевного материала для инокуляции деревянных чурок или гряд со свежей древесной щепой при выращивании грибов на улице.

Для большинства культивируемых видов грибов, формирование плодовых тел начинается вскоре после того, как для культуры создают условия пониженной температуры, дают больше света и свежего воздуха (при условии, что субстрат полностью колонизирован). На этом этапе нет большой нужды в наличии перекиси, потому что мицелий уже хорошо развился.

Точные руководства по инициированию плодоношения отличаются от вида к виду, а их описание выходит за рамки этой книги. Тем не менее, я дам некоторые советы примени тельно к видам, которые я предпочитаю. Две разновидности грибов, с которыми я более всего знаком и которые легче всего заставить плодоносить — это Hypsizygus ulmarius (Белый ильмовый гриб) и Hericium erinaceus (Львиная грива, Пом-Пом, гериций). Многие виды рода устричных грибов плодоносят при тех же условиях, которые требуются для Н. ulmarius. Другие виды, с которыми у меня хорошо идут дела, включают Pleurotus eryngii (Королевская устрица) и Agaricus subrufescens (Миндальный гриб), но условия плодоношения для них другие. Шиитаке, в свою очередь, требует еще одних условий.

Большинство «простых» видов грибов готовы к плодоношению, когда субстрат полностью освоен мицелием. Часто субстратные блоки выглядят белыми, по сравнению с первоначальным коричневым цветом субстрата. Время, необходимое для достижения культурой зрелости, зависит от мицелия, субстрата и температуры инкубации. Hericium уже через 2–3 недели может начать формирование небольших шарообразных примордий белого цвета на верхней стороне блока, но я предпочитаю выждать в течение месяца перед тем, как открывать пакет.

Н. ulmarius осваивает еловые опилки или солому примерно за 5 недель, а дубовые опилки — за 6 недель (при обычной комнатной температуре), после чего начинается спонтанное формирование примордий, которые образуются небольшими группами. Если на боковой стороне пакета с мицелием сделать с помощью чистого ножа крестообразные или одиночные надрезы, то грибы вида Н. ulmarius и представители рода Oyster начнут формировать примордии возле места разреза. Формирование примордий занимает одну-две недели, после чего развиваются плодовые тела. Когда грибы достигнут размера 2.5–3 см, необходимо производить увлажнение с помощью пульверизатора.

Hericium также формирует плоды на месте разреза на пакете, но в зимнее время мне кажется более простым выращивать большие плодовые тела, позволяя грибу плодоносить внутри пакета. Просто кладем блок на бок и слегка приоткрываем пакет, обеспечивая воздухообмен, но в то же время не допуская потери влаги. Плодовые тела начнут образовываться в произвольных местах из примордий, которые к этому времени уже успели развиться.

Если вы выращиваете всего несколько субстратных блоков, вентиляция не будет представлять больших сложностей. Но с увеличением числа блоков необходимость в вентиляции для удаления углекислого газа возрастает. Если ваши грибы не получат во время развития достаточного количества воздуха, это вызовет их деформацию. Например, Н. ulmarius и другие устричные грибы в условиях повышенного содержания углекислого газа будут расти с длинными ножками и недоразвитыми шляпками. Если количество блоков таково, что для проветривания уже требуется вентилятор, то не за горами вопрос об использовании автоматической системы увлажнения.

Помните, что если вы решили выращивать в домашних условиях Н. ulmarius или другой вид устричных грибов, вам, вероятно, придется предпринимать определенные меры для собственной защиты от невероятного количества спор, производимых этими организмами. Снизить число спор помогает собирание этих грибов в молодом возрасте. Накрывание плодоносящих культур тканью типа Reemay ТМ или подобным материалом для покрытия грядок, позволит задержать основную массу спор под покрытием, но в то же время обеспечит достаточный для нормального плодоношения газообмен. Тем не менее, если кто-то в вашей семье чувствителен к спорам, вам может понадобиться приобрести очиститель воздуха для того, чтобы удалить споры в жилом пространстве, или же придется выращивать грибы за пределами жилого помещения.

Миндальный гриб, белый шампиньон, равно как королевская строфария и навозник (а иногда и королевский устричный гриб), требуют нанесения на субстрат покровного слоя, стимулирующего формирование плодовых тел. Покровный слой — это специально подобранная смесь, имитирующая влажную, рыхлую и суглинистую почву. Эта смесь содержит микроорганизмы, которые содействуют формированию грибов и представляет собой резервуар, снабжающий подрастающие грибы водой. Обычно покровный слой содержит мало питательных веществ, которые мог бы усваивать растущий мицелий, и эта особенность также является сигналом для грибной культуры, побуждая ее к формированию плодовых тел.

В состав покровного слоя обычно входит торф, поэтому простая формула смеси, которую я использую для миндального гриба, включает одну часть торфа, смешанную с одной частью садовой земли, плюс горсть гипса (сульфата кальция) на восемь-двенадцать литров смеси. Смесь должна быть увлажненной, но не должна при этом слипаться. Постарайтесь не притрамбовывать ее, поскольку пористая структура является очень важным фактором для начала формирования примордий грибов.

Торфяные болота по всему миру находятся под угрозой, поэтому нам следует искать альтернативы использованию торфа в покровном слое. Грибоводы в различных странах уже продумывают альтернативные способы, в чем можно убедиться, заглянув в базу данных nameнтов США (см. http://www.uspto.gov/). В некоторых случаях в качестве покровного слоя используют только почву, в других — почву с вермикулитом. Вермикулит сам по себе тоже является возможной альтернативой (хотя он и не содержит микроорганизмов). Миндальный гриб и королевский устричный гриб не требуют нанесения покровного слоя в обязательном порядке (хотя, в случае с грибом P. eryngii, покровный слой значительно ускоряет формирование примордий), поэтому подбор соответствующих условий для этих видов может привести к хорошему плодоношению и без покровного слоя.

Если вы нанесли покровный слой, вам придется подождать неделю или две, чтобы мицелий пророс сквозь него и началось формирование грибов. Для миндального гриба в это время требуется подогрев (я ставлю коробки с культурой на электрическую грелку для кошек, чтобы гарантированно обеспечить нужную температуру). Для поддержания покровного слоя во влажном состоянии, его следует слегка опрыскивать водой один раз в два дня (для вида P. eryngii подогрев и опрыскивание не обязательны). Грибы обычно начинают формироваться через несколько дней после того, как мицелий достигнет поверхности покровного слоя.

Сезонное планирование

Если вы выращиваете небольшое количество грибов и в вашем распоряжении имеется прохладное, изолированное помещение типа подвала с освещением, то у вас, скорее всего, будет возможность выращивать свои любимые грибы круглый год. Тем не менее, если вы выращиваете грибы на улице или большое количество грибов в помещении (что требует вентилирования наружным воздухом), вам, возможно, придется планировать рост соответствующих культур в подходящее время года. Я выращиваю грибы в подвале с открытыми окнами и вентилятором, нагнетающим снаружи свежий воздух, поэтому культивирование усложняется в наиболее жаркий летний период и в наиболее холодный зимний. Закрывание окон в данном случае не поможет, так как это приводит к возрастанию уровня углекислого газа, что тормозит формирование грибов. В принципе, входящий воздух можно охлаждать или нагревать, но счет на электроэнергию при этом растет так стремительно, что мне это совсем не по вкусу. Поэтому мои грибы лучше всего растут осенью и весной.

Во время зимних холодов уровни температуры и освещенности падают. Все виды грибов колонизируют основной субстрат в течение более длительного времени. Р. eryngii плодоносит с трудом, а Н. ulmarius растет очень медленно, образуя длинные ножки (и деформированные шляпки, если уровни освещения и температуры слишком низки). Н. erinaceus в это время также растет медленно, но этот вид все равно производит нормальные, хоть и маленькие, плодовые тела, даже во время очень холодной зимы. Agaricus subrufescens любит тепло, но, как это ни парадоксально звучит, благодаря такой особенности этот гриб хорош для выращивания в зимнее время, потому что он плодоносит в обогреваемом помещении и, в отличие от других грибов, особо не нуждается в проветривании и освещении.

Во время летней жары нет недостатка в естественном свете, но при повышенных температурах инициирование плодоношения может оказаться проблематичным. Поддержание высокой влажности также может представлять трудность. Вместе с тем, однажды блоки гериция начали плодоносить на куче сухого компоста при температуре 32 °C. Очевидно, что в данном случае плодоношение было инициировано свежим воздухом, потому что блоки гериция в помещении отказывались плодоносить до тех пор, пока не произошло существенного понижения температуры. А. subrufescens любит теплую погоду и имеет тенденцию к плодоношению после прохождения температурного пика. Ganoderma lucidum тоже предпочитает теплую погоду, как и строфария.

Выращивание грибов на улице (альтернатива домашнему культивированию)

Раньше я выращивал все свои грибы в помещении. Это позволяло мне растить их круглый год при умеренной температуре и избавляло от проблем со слизняками и улитками, которые любят грибы и водятся в больших количествах в моей местности (признаться, некоторые из них умудряются взобраться на окно, спуститься по бетонной стене и, проползая по цементному полу, оказаться на плодоносящих грибных культурах). Кроме того, грибы могут поедать олени, а еще одной проблемой при выращивании грибов на улице являются грибные комарики. Поэтому в прошлом я всегда рекомендовал выращивать грибы в помещении. Но культивирование на улице тоже имеет свои преимущества. Во-первых, грибы, выращенные на улице, имеют заметно более насыщенный аромат по сравнению со своими собратьями, выращенными в помещении. Во-вторых, на свежем воздухе грибы формируются более крепкими. На улице больше физического пространства для плодоношения, а проблема с попаданием спор в дыхательные пути значительно уменьшена. С грибными комариками можно в какой-то мере бороться, накрывая культуры тонкой и легкой тканью, как, например Reemay™, или другим материалом для накрывания гряд. Если вы живете на побережье в районе с умеренным климатом, вы сможете выращивать грибы на улице круглый год. Поэтому, если вы считаете, что сможете вести борьбу с вредителями, выращивайте ваши культуры на улице. Вам понадобится всего лишь затененное место, которое нужно будет поддерживать во влажном состоянии.

Сбор урожая

Время сбора урожая в значительной мере определяется размерами созревших грибов и тем, какие они при этом претерпевают изменения. Для видов P. eryngii и Н. ulmarius признаком достижения зрелости обычно является распрямление подвернутых до этого краев шляпки, но для полной уверенности следует соотносить этот признак с размером гриба. В случае с А. subrufescens, шляпка раскрывается и гимениальные пластинки приобретают красноватый оттенок. У гриба Н. erinaceus формируются небольшие «сосульки», а сам гриб становится более мягким.

Считается, что большинство грибов обладают лучшим вкусом, если их собирать до начала массового распространения спор, хотя они могли бы вырасти и до больших размеров, если бы их оставили расти дальше. Это, безусловно, относится к виду Н. ulmarius, который вкуснее в молодом возрасте, но я не проводил таких сравнений для других видов грибов, которые я выращиваю.

Возможные ошибки, собранные в виде списков, всегда повергали меня в уныние, поэтому я решил пойти другим путем. Я составил список вопросов, которые касаются различных аспектов процесса культивирования и могут помочь найти правильное решение при наличии проблем, связанных с заражениями.

Если вы добавляете в среду перекись, но заметные заражения все равно имеют место, вам следует задать себе следующие вопросы:

• Действительно ли концентрация перекиси в приготовленном вами растворе является такой, какой она должна быть? Не месяц ли назад вы измеряли ее в последний раз?

• В порядке ли ваша скороварка и правильно ли она работает?

• Достигает ли пар банок и омывает ли он их? (Достаточно ли свободно установлены крышки? Если вы используете скороварку, позволяете ли вы пару предварительно в течение 5 минут нагреть банки, прежде чем вы за кроете регулятор давления?)

• Если вы пользуетесь электроплитой, равномерно ли нагревается конфорка?

• Обеспечена ли достаточно высокая температура стерилизации, а если да, то в течение достаточного ли времени, чтобы уничтожить внутренние источники заражения и, если необходимо, перекисеразрушающие ферменты?

• Достаточно ли влажен субстрат, чтобы пар мог прогреть его?

• Не был ли испорчен субстрат или добавка еще до использования?

• Равномерно ли распределилась перекись по субстрату?

• Правильно ли измерено значение pH субстрата? (перекись наиболее стабильна при нейтральном pH)

• Если плодоносящий субстрат подвергается заражению, чист ли посевной мицелий?

• Если посевной мицелий подвергается заражению, чиста ли первичная культура?

• Когда вы добавляете в субстрат раствор перекиси, не попадают ли туда капельки раствора, которые до этого текли по нестерильной поверхности?

• Нет ли на чашках петри следов от старого агара?

• Если агаровые чашки подвергаются заражению, происходит ли оно на поверхности агара или внутри среды? Если заражение выявлено на поверхности, то его источник находится вне агаровой среды, если заражение находится внутри агара, то оно произошло перед или во время разлива агара.

• В достаточной ли степени была охлаждена агаровая среда или субстрат перед добавлением перекиси?

• Чиста ли вода и не содержит ли она посторонних частиц?

• Не попадает ли в среду какой-нибудь не стерильный или не пастеризованный материал, а вы этого не замечаете?

• Получают ли грибы достаточно света (но не прямого солнечного), свежего воздуха и влаги, чтобы им вырасти до хороших размеров?

Вот мы и достигли последней страницы этого тома. Позвольте мне сделать некоторую паузу, чтобы все обдумать. Я назвал этот том «Выращивание грибов простым способом» и сейчас самое время спросить себя, не слишком ли я, в порыве легкого самодовольства, все упростил с этим названием? В конце концов, путь к успешному грибоводству достаточно тернист, а легкие пути обычно ведут к проблемам. Иногда я думаю: не чудо ли, что грибные организмы вообще отвечают на наши кропотливые манипуляции тем, что производят на свет удивительные плодовые тела?

Да, это чудо. И даже с применением перекиси для защиты грибных культур, этот процесс является далеко не самым простым. Тем не менее, я чувствую удовлетворение от того, что приведенные мной методики действительно позволяют грибоводу-любителю, соблюдая самые минимальные требования к стерильности, осуществлять все этапы выращивания деликатесных грибов и грибных культур в обычных домашних условиях, делать это гораздо проще, чем когда бы то ни было, без специального оборудования, необходимого для обеспечения стерильности, используя для работы только кастрюлю с решеткой и измерительную пипетку.

Теперь, когда проблема борьбы с заражениями отходит на задний план, грибоводы-любители могут вздохнуть полной грудью и сосредоточить свое внимание на том, что привлекает нас в грибоводстве больше всего — на возможности вырастить еще больше видов превосходных и деликатесных грибов.

Том II

Я написал второй том моего руководства по выращиванию грибов для облегчения процесса выращивания. В этом томе будут рассмотрены новые идеи посвященные этому процессу, не вошедшие в первый том.

Как и в первом томе, большинство методик рассчитано на мелкосерийное производство в домашних условиях. Однако первые два метода я разрабатывал для коммерческих объемов производства, да и остальные приведенные методы могут иметь коммерческое применение.

Представленные здесь методики описаны в порядке их логического использования при культивировании грибов. Так, в начале книги описаны методики проращивания спор и поддержания грибных культур. Затем описан метод подготовки спор, заканчивается книга описанием методов подготовки питательного субстрата.

Хотя описанные методы адаптированы для опытных грибников, уже имеющих опыт выращивания грибов с применением перекиси водорода, новички тоже смогут использовать данные методики.

Описанные в данной книге методы выращивания с применением перекиси водорода, являются моей авторской разработкой. Методы без применения перекиси являются общеизвестными, и описываются мной для создания полноценной методики выращивания.

Сказано уже достаточно, давайте начнем!

Использование «косяков» вместо агаровых пластин.

Методика выращивания грибных культур на ровной агаровой поверхности в чашках Петри, довольно распространена в микологических лабораториях. Но поскольку множество грибников по тем или иным причинам не желают использовать этот метод, придется поискать другой, более простой способ выращивания. Возможно главный недостаток выращивания на агаре в чашках Петри — это обширная поверхность питательной среды, способствующая большой вероятности заражения. Даже с использованием перекиси, колонии контаминантов могут появиться на краю агаровых пластин из-за контакта с не стерильной атмосферой при пересадке.

Одним из решений этой проблемы является уменьшение площади поверхности агаровой среды, например, использование пробирок (типичные размеры 19х125 мм.). Они относительно легки в обращении и хранении, а уязвимую для контаминантов горловину пробирки, можно прожечь в пламени спиртовки при открытии и закрытии пробкой. Вода при хранении испаряется из пробирки намного медленней, чем из чашки Петри, что позволяет дольше сохранять в среде рабочую концентрацию перекиси. Даже без применения перекиси, уровень заражения пробирок низкий. К тому же, количество среды, используемой в агаровых косяках, меньше, чем в чашках Петри. Таким образом, использование метода посева на «косяках» обойдется вам дешевле.

Заливка косяков.

Как залить ряд косяков:

1. Отмерьте компоненты для агаровой среды в жестяную банку достаточного объема (250 мл. среды хватит, примерно, на 20 косяков). Сожмите край банки для формирования «носика», чтобы упростить процесс разливки.

2. Залейте в банку насчитанное количество воды и прикройте банку кусочком фольги.

3. Поместите банку в скороварку и пропарьте без давления в течение 10 минут. Затем закройте клапан скороварки и варите еще 10 мин. В эту же скороварку можно поместить и пробирки для заливки косяков.

4. Снимите скороварку с огня, и после небольшого охлаждения, сбросьте пар из скороварки (не сбрасывайте давление слишком резко, среда выплеснется из банки). Как только давление снизилось, вынимайте среду для разлива. Можете позволить ей слегка охладится, но не до застывания.

5. Добавьте перекись (1,5 мл. для 250 мл. агаровой среды) пастеризованной пипеткой (то есть погруженной на время в кипящую воду).

6. Залейте агар в пробирки тонкой струей, ни в коем случае не испачкав края пробирки. Держите пробку от пробирки в руке при разливе, прижимая ее мизинцем.

7. Закройте пробирку пробкой и установите пробирку на уклон для формирования косой поверхности и застывания среды.

Для легкого воспроизведения привожу рецепт, используемый мной среды для среды MYA (описан в первом томе).

Работа с культурой на «косяках»

Для прививки культуры и забора мицелия полезно иметь микробиологические петли из жесткой проволоки. Вы можете сделать микробиологическую петлю самостоятельно: сформируйте на конце проволоки маленькую петлю, другой конец проволоки пропустите через тонкую стеклянную трубку (3–3,5 мм в диаметре). Расплавьте на газовой горелке кончики трубки, вплавив (нихромовую или стальную) проволоку. Получится микробиологическая петля с стеклянной ручкой.

Для успешной прививки вы должны перенести на «косяк» микробиологической петлей кусочек агара с мицелием (если перенесенный кусочек мицелия с агаром слишком мал, или если вы захватили петлей часть мицелия без кусочка агара, то возможно мицелий не приживется на «косяке»). Если перенос мицелия не удался в первый раз, вы всегда можете попробовать перенести мицелий еще раз на этот же «косяк», сохранив стерильность среды, перекись в среде вам в этом поможет. При пересадке я захватываю микробиологической петлей минимально необходимый для прививки кусочек агара с мицелием. На первых порах это сделать непросто, но со временем у вас все получится. При манипуляциях с пробиркой, не забывайте прожигать в племени спиртовки горлышко пробирки и пробку.

Очистка мицелия на «косяках».

В первом томе «Выращивание грибов простым способом» я объяснил, как невидимое микробное загрязнение может расти на культуре мицелия выращенного методом с применением перекиси. Там же я представил метод очистки от этих загрязнений путем проращивания культуры мицелия через непитательный агар. На «косяках» невидимая инфекция должна расти немного медленнее, чем на чашках Петри. Но, в конечном счете, все равно происходит накапливание инфекции. Не существует удобного способа посева мицелия в основание агара в пробирке, поэтому мы используем другой путь. Этот метод состоит из заливки второго слоя агара, поверх вросшего мицелия. Таким образом, мицелию ничего не остается как прорости уже чистым через новый слой агара.

Вот как это делается:

1. Сделайте прививку мицелия на косой агар и дайте ему немного закрепиться на нем.

2. Приготовьте по прописи маленькое количество агаровой среды в жестяной банке с отогнутыми краями в виде носика (для удобства разлива по пробиркам среды).

3. После приготовления среды и охлаждения добавьте перекись по прописи и тщательно перемешайте.

4. Дождитесь остывания смеси почти до застывания, и в пламени спиртовки разлейте среду по пробиркам (пробирку можно покрыть слоем агара вертикально или сделать скос). Чем тоньше слой покрывающего агара, тем меньше времени потребуется мицелию для прорастания[62].

5. Закройте пробирку пробкой.

6. Поставьте пробирки в теплое место для инкубации.

Посев спор.

Я обычно убеждаю потенциальных грибников начинать их грибные исследования со здоровых, чистых культур, полученных от проверенных поставщиков. Такие культуры проверены и гарантировано дадут хороший урожай при культивации. Если вы потеряете свою культуру, вы всегда сможете взять у поставщика новую чистую линию. Если вы начинаете со спор, то нет никакой гарантии, что полученная вами мицелиальная культура будет плодоносить так же хорошо и будет иметь те же особенности, что и родительский гриб, от которого получены споры. Так же вы не будете знать оптимальные условия для роста мицелия, вам придется их искать самостоятельно. Если вы потеряете свою линию, вам придется начинать все сначала.

Однако есть и положительные аргументы. Культуры, полученные из спор, обычно более энергичны, чем мицелий, полученный из пересевов. Споры могут стоить мало или совсем ничего не стоить, а чистая мицелиальная культура может оказаться очень дорогой. Споры могут быть получены из высушенного гриба, в отличие от мицелия и т. д. Таким образом, получение линии из спор может быть использовано с тем же успехом, как и из чистой линии.

В предыдущей книге я писал, что споры не могут прорастать в среде содержащей перекись.

Я получил письма от нескольких грибников. Они писали мне, что им удалось прорастить споры в присутствии перекиси. Должен признать, что это действительно возможно, если концентрация вносимых спор велика. Однако не думаю, что это хорошая идея. Проросший в этих условиях мицелий может иметь генетические повреждения. И как оказывается не особенно трудно сделать проростку спор в неперекисной среде, несмотря на возможные заражения. При применении метода посева на «косяки» шанс заражения уменьшается до минимума по сравнению с чашками Петри (большое спасибо Дэвиду Сару за то, что сообщил мне об этом подходе).

Подготовка «косяков» для проращивания спор.

Чтобы подготовить скошенный агар для спор, следуйте выше приведенной методике с небольшими изменениями. При приготовлении среды не добавляйте перекись.

1. Прогрейте подготовленную среду в скороварке в течение 10 минут.

2. Залейте расплавленную среду в пробирки.

3. Закройте пробирки пробками и стерилизуйте под давлением в скороварке.

4. Разместите пробирки с горячей средой наклонно для застывания и формирования скосов.

В качестве альтернативного метода, вы можете простерилизовать пробирки и среду раздельно, разлить среду по пробиркам в стерильных условиях.

Чтобы вырастить споры одной разновидности гриба, имеет смысл засеять 5–6 «косяков», возможна потеря пары «косяков» вследствие заражения. Часть «косяков» может не прорасти.

Получение спор.

Способы сбора спор:

1. Пропарьте несколько чашек Петри в скороварке под давлением в течение 15 мин. И охладите их[63].

2. Выберете зрелое плодовое тело гриба, с которого вы хотите получить споры. Гриб должен быть чистым, без загрязнения землей.

3. Выберете чистую поверхность, в закрытом помещении без сильных воздушных потоков. Протрите поверхность губкой, смоченной в спирте.

4. Откройте одну из чашек Петри (можете положить крышку на край чашки), положите грибное тело в чашку так, чтобы гриб не касался дня чашки (для маленьких плодовых тел, натяните нити и положите на них гриб).

5. В зависимости от разновидности гриба, процесс сбора спор может занять некоторое время. Сбор спор можно считать законченным, когда на дне чашки появится видимый налет спор. После этого удалите гриб и закройте чашку.

Проращивание спор.

Вот один из способов проращивания спор:

1. Настройте свет и поставьте горящую спиртовку на ровной чистой поверхности. Рядом поставьте пробирки со скошенным агаром и чашку со спорами.

2. Прожгите микробиологическую петлю в верхней части пламени спиртовки.

3. Откройте одну из пробирок (придерживайте пробку мизинцем другой руки). Горлышко пробирки должно быть в пламени спиртовки. Проведите петлей по поверхности агара, для лучшей прилепляемости спор к петле. Выньте петлю из пробирки и закройте ее.

4. Откройте чашку со спорами и проведите концом петли по покрытой спорами поверхности.

5. Откройте снова пробирку, держа ее горлышком в пламени спиртовки, и проведите кончиком петли по поверхности агара.

6. Выньте петлю и закройте пробирку пробкой.

7. Поместите пробирки с культурой в теплое место. Прорастать споры могут от нескольких дней до нескольких недель, в зависимости от вида гриба.

В конечном счете, вы увидеть рост маленьких белых колоний гриба на «косяках». Будет необходимо отличать колонии грибного мицелия от колоний других загрязнителей. Некоторые контаминанты в начале развития имеют белые колонии, похожие на колонии чистой культуры, но они довольно быстро приобретают синюю или зеленую окраску при спороношении[64]. Дикие дрожжи и бактерии могут образовывать лучистые колонии слегка окрашенные или бесцветные, однородные и не имеющие гифов, как грибные. Как только вы убедитесь, что выросшие колонии действительно принадлежат нужному грибу, пересаживайте гриб на перекисную среду.

При рассматривании роста мицелия на перекисном агаре в чашках Петри, вы можете увидеть кольца (ареолы) роста мицелия. Если мицелий не однороден или загрязнен, то ореол на чашке покажет наличие секторов с различной скоростью роста. В этом случае можно взять мицелий для пересадки с края сектора, имеющего хороший радиальный вырост, и использовать его для пересадки на другую чашку Петри. Как только вы получите устойчиво растущий, без секторов, мицелий, можете использовать его для инокуляции субстрата. Не забывайте делать высевы для сохранения линии!

Идеи к ведению культуры мицелия без агара.

Агар вероятно самый дорогой компонент, используемый при культивировании мицелия. Не смотря на то что, относительно просто следовать приведенным методикам работы с агаром, множество начинающих грибников избегают работать с собственными грибными линиями из-за отсутствия опыта работы с агаром. В качестве альтернативы, я предлагаю один из способов выращивания грибных культур — на сером картоне. Серый картон дешев и доступен, а так же не содержит перекисеразрушающих ферментов. В отличие от рифленого картона, серый картон достаточно мягок и хорошо намокает. Он так же хорош как питательная среда для мицелия, способен поддерживать быстрый рост даже в тех случаях, когда отсутствуют другие питательные вещества. В случае необходимости, питательные вещества легко добавить в него.

Так, вместо того, чтобы отвешивать все необходимые вещества для приготовления агаровой среды, плавить агар, медленно охлаждать для добавления перекиси, заливать в чашки и ждать их отвердения и просушки, вы можете просто обрезать картон по размерам чашки и пропитать его водой или необходимым питательным раствором. После заливки картонных дисков, стерилизуйте их в скороварке 10 мин.

Если вам трудно достать серый картон, то его можно заменить газетной бумагой. Но эта замена имеет некоторые недостатки по сравнению с серым картоном. С одной стороны трудно контролировать рост мицелия из-за неравномерности окраски газетной бумаги. Когда мицелий растет на бумаге, он может быть тонким как паутинка, и располагаться преимущественно на нижней, скрытой стороне. Кроме того, рост мицелия редко проявляется в виде четких круговых ареолов, таких как вырастают на агаре. Так же наблюдается неравномерный рост мицелия между слоями бумаги.

Я еще не выяснил, может ли мицелий неоднократно расти на смоченном картоне без дополнительных питательных веществ. Ожидаемо, что рост на картонных дисках замедлится без внесения дополнительных источников азота. Для длительных пересадок на картонных дисках я рекомендую добавлять в раствор источник азота.

Как подготовить пластины.

Вот детальное описание методики подготовки картонных дисков. Заметьте, что вместо чашек Петри, вы можете использовать любую подходящую посуду.

1. Отмерьте примерно 100 мл. воды из под крана в маленькую банку.

2. Для приготовления питательной среды, возьмите другую маленькую банку, налейте в нее 100 мл. воды из под крана и добавьте туда чайную ложку патоки (меда) или солодового порошка.

3. Найдите небольшой лист серого картона, чем толще, тем лучше. Предпочтительно с двусторонней серой окраской. Вырежьте из него несколько дисков в размер чашек Петри.

4. Взвесьте один картонный диск и запишите его вес. Умножьте этот вес примерно на 1,3 (с разным картоном возможны разные варианты) и добавьте высчитанный вес воды или питательного раствора к каждому диску в чашку Петри.

5. Закройте чашки крышками и дайте им пропитаться.

6. Стерилизуйте чашки в скороварке под давлением 10 мин. (прежде чем закрыть клапан, продуйте скороварку паром 10 мин.).

7. Охладите скороварку и выньте чашки.

8. Когда вода охладилась, добавьте в банку со стерилизованной водой в расчете на каждую чашку 3,3 мл. 3 % раствора перекиси водорода используя пастеризованную кипятком пипетку. Концентрация перекиси должна составлять примерно 0,1 %.

9. Добавьте в каждую чашку 0,1 % раствора перекиси примерно треть от веса картона, после этого чашки готовы к использованию.

Вы можете хранить чашки с дисками в пищевых пластиковых емкостях. Вероятно вы столкнетесь с проблемой быстрого высыхания картонных дисков. Для решения этой проблемы добавьте небольшое количество перекиси в контейнер с чашками. Поставьте чашки на небольшую платформу, для того что бы перекись не заливала чашки.

Пересев.

Вероятно, вы задаетесь вопросом, каким же образом совершить пересев с картонного диска?

Метод пересева прост — стерильным скальпелем поскребите поверхность влажного картонного диска с мицелием, это позволит соскоблить колонию гриба с частичками картона и перенести на другую чашку.

Рифленый картон слишком жесток для легкого удаления мицелия с поверхности.

Очистка мицелия.

Я уже объяснял в первом томе, что скрытые контаминанты могут расти на поверхности мицелия, росшего на перекисной среде, поскольку перекись на поверхности мицелия отсутствует. Периодически грибные культуры должны очищаться от скрытых инфекций, иначе они могут присутствовать в грибных плодах, и попасть в споровый материал.

Мицелий, выращенный на картонных дисках, не является исключением.

С агаровыми культурами мы чистили мицелий с помощью довольно неуклюжей процедуры — изъятия агарового диска из основания чашки Петри в крышку, и прививки мицелия на нижнюю сторону агара. После приростания мицелия агаровый диск возвращался на место. Это вынуждало агар прорастать через среду оставляю загрязнители позади. Хотя этот способ неплохо работает, применение его дает большое количество брака из-за большого количества механических операций.

С картоном легко делать прививку в основание диска: вам нужно только перевернуть чашку вверх дном и потрясти ее, чтобы диск отвалился от дна чашки и прилип к крышке. Перенесите образец мицелия на внутреннюю поверхность диска стерильным скальпелем, закройте чашку и, перевернув чашку, щелкните по ней. Диск отклеится от крышки и вернется на место. Но как оказывается, мицелий прорастает сквозь диск очень медленно, предпочитая расти по сторонам. Вместо того, что бы ждать пророста мицелия в центре, мы позволяем мицелию свободно расти под слоем картона. Влияние загрязнений, попадающих с боковой стороны, несущественно. Эта процедура обеспечивает чистоту мицелия, если вы берете материал для пересева с края колонии.

Если у вас не получается остановить распространение инфекции высевом мицелия в центр диска, можете попробовать сделать из двух смоченных дисков «сандвич» и сеять между ними. Несъедобность картона должна затормозить распространение инфекций. Когда вы захотите извлечь мицелий из «сэндвича», нужно вырвать кусочек картона с мицелием из периферии. Поскольку вы не можете наблюдать, как далеко пророс мицелий, вам нужно внимательно следить за временем инкубации. Нужно дать мицелию достаточно времени для прорастания.

Хранение культур без агара.

Недавно засеянные картонные диски могут быть извлечены стерильным пинцетом и сохранены в стерильном ziplock[65]-e. После перенесения, дайте мицелию вырасти в течение недели или двух. В качестве альтернативы — узкие стерилизованные увлажненные полоски картона можно привить маленьким кусочком агаровой культуры, затем, с помощью стерильного пинцета, поместить в пробирку для хранения. Когда придет время восстанавливать культуру из хранения, данная полоска может быть помещена в чашку Петри со средой для культивации. Еще один способ состоит в увлажнении и стерилизации небольших бумажных гранул в пробирке в течение 10 минут, и прививки небольшим количеством агаровой культуры. После того как мицелий вырастет, культура может быть сохранена в течение длительного периода.

Я еще не проверял, как долго такие культуры способны сохранятся, но подозреваю, что дольше, чем агаровые, так как влажная бумага и картон, больше походят на природные условия существования грибов. Если вы не будете добавлять никакого дополнительного питания, то среда будет скудной, что обычно и рекомендуется для длительного хранения.

Пересылка культур по почте.

Культуры, посеянные на бумаге или картоне, могут быть легко отосланы по почте. Сделайте бутерброд мицелия между двух картонных дисков, поместите его в ziplock и прорастите несколько дней. Поместите его в пакет или книгу.

Такой метод отправки мицелия вероятно ограничен разновидностями грибов способными переносить низкие температуры, действию которых мицелий может подвергнутся, путешествуя в багажном отделении самолета. Теплолюбивый мицелий грибов, таких как Миндальный гриб (Agaricus subrufescens), должен быть дополнительно защищен в теплоизолирующем контейнере.

Субстрат — «восьми минутка»

В «Выращивании грибов простым способом» я описал процедуру для подготовки субстрата в стеклянных банках или контейнерах. Это мой любимый метод подготовки субстрата, но я решил немного видоизменить его.

Возможно, вы не располагаете стеклянными банками, но у вас есть полиэтиленовые пакеты. Вы свободно можете использовать их как емкость для субстрата — фактически они имеют преимущество перед банками. Субстрат в пакетах проще перемещать, чем в стеклянной таре.

Другое преимущество пакетов состоит в лучшем снабжении субстрата кислородом. Так же процесс стерилизации в пакетах идет быстрее.

С другой стороны, полиэтилен пакета не съедобен для гриба (пакет можно вымыть после окончания роста гриба и снова использовать). Пакеты могут получить крошечные отверстия незаметные невооруженным глазом. Так же пакеты неудобны для отсыпания части субстрата (из банки проще вытряхнуть часть субстрата в контейнер).

Создание субстрата.

Вот мой рецепт приготовления шести пакетов с субстратом в течение 8 минут. Одного пакета субстрата достаточно для засева 20 литрового ведра, или примерно 3–4 килограмма сухого веса субстрата.

1. Засыпьте гранулы в ведро и залейте их жидкими компонентами, перемешайте.

2. Добавьте оставшиеся компоненты и размешайте до распада шариков на отдельные опилки.

3. Разделите субстрат на порции примерно 250–300 г. и насыпьте в 6 полиэтиленовых пакетов.

4. Поместите пакеты в большую кастрюлю, налейте в нее воды до уровня примерно 10 см и закрепите горловины пакетов.

5. Закройте крышкой и кипятите примерно 8 минут.

6. Выньте пакеты из кастрюли и охладите их под струей воды, стараясь не намочить их содержимое.

7. Когда пакеты остынут, выньте их из воды и перевяжите горловины пакетов на расстоянии 3–4 см. от субстрата.

8. Когда пакеты полностью остынут, они будут готовы к засеву.

Использование субстрата.

Перед засевом мицелия в пакеты, его нужно размять на мелкие частицы. Позаботьтесь о том, чтобы не повредить оболочку пакета. Так же вы должны учитывать, что пакет выше уровня перевязки не стерилен. Поэтому для засева:

1. Оттяните верх пакета.

2. Раскройте пакет, касаясь только внешней поверхности пакета.

3. Откройте поверхность субстрата слегка вывернув горловину пакета.

Первый субстрат.

Приготовление соломы с перекисью при комнатной температуре.

Этот метод привлекателен как для домашнего приготовления, так и для массового коммерческого применения, потому что для использования нам не потребуется нагревать субстрат. Это делает подготовку субстрата простой и недорогой процедурой, не требующей применения дорогих агрегатов.

Я проверил этот метод с Устричным грибом (Н. Ulmariu) и с Миндальным грибом (Agaricus subrufescens). Данный метод годится для выращивания всех грибов, способных расти на древесине без добавления источников азота. Есть сомнение в возможности вырастить на этом субстрате гриб Шитаке, так для его роста могут требоваться дополнительное внесение азота.

Вопрос насчет содержания ферментов?

Должен признать, что в предыдущем руководстве я поставил под сомнение возможность использования пастеризованного соломенного субстрата совместно с перекисью водорода.

Я рассуждал так, что содержащиеся в соломе ферменты будут способствовать быстрому разложению перекиси, и оставят в целостности содержащиеся в соломе посторонние споры. Однако позже я выяснил, что солома может быть использована совместно с перекисью. Действительно, перекись на соломе быстро разрушается, но если мы поднимем концентрацию, то даже за малое время перекись производит стерилизующий эффект.

Описание.

Несмотря на сложное объяснение, сам рецепт соломы с перекисью прост:

1. Поместите вашу солому в большое ведро для намачивания.

2. Залейте солому смесью (см. ниже) и притопите ее ниже уровня жидкости.

3. Для мелкой соломы пропитку делайте в течение 4 часов при комнатной температуре. Для крупной, не менее 28 часов, или пока жидкость не приобретет чайный цвет.

4. Слейте жидкость с соломы.

5. Добавьте солому в контейнеры для приготовления субстрата.

Примечания относительно соломенной технологии:

1. Если положить на ведро с соломой крышку с грузом, то это позволит полностью притопить солому.

2. Самое эффективное решение найденное мной, это использование 0,15 % перекиси водорода в смеси с 10 мл. столового уксуса на литр смеси (более высокие концентрации уксуса не работали в проведенных испытаниях).

Любопытно, что в качестве альтернативы уксусу, прекрасно работал раствор гидроокиси кальция в перекиси.

Для раствора приготовления раствора используйте 0,5 г. извести на литр 0,15 % перекиси.

Смеси можно готовить на холодной воде, но лучше на воде, имеющей комнатную температуру.

1. Я рекомендую нарезать солому. Резаная солома лучше впитывает воду, что способствует росту мицелия. Пропитка соломы идет медленней в холодной воде, и быстрее в теплой.

2. Как долго вы будете намачивать солому зависит от ее количества, но в любом случае не менее нескольких часов.

3. Солома может быть смешана с субстратом и разложена в пластмассовые емкости. Так же на данном этапе можно добавить в солому гипс.

Я не рекомендую добавлять к соломе дополнительные источники азота, поскольку это вызовет рост загрязнителей. Если для культивирования вам нужно присутствие дополнительного азота, можете использовать сено люцерны.

Второй субстрат.

Метод «Добавить и размешать» для субстратов совместимых с перекисью.

Эта процедура позволит вам приготовить грибной субстрат при комнатной температуре в одно действие. В отличие от соломенной технологии, данный метод требует использование материалов не разрушающих перекись. Вы можете использовать бумажные гранулы или любой другой схожий субстрат типа опилок. Как описано в моих более ранних исследованиях, добавляемая перекись защищает субстрат от закисания.

В первой книге я представил процедуру замачивания древесных гранул в кипящей воде, для пастеризации и разваривания шариков. Метод с применением перекиси, добавляемого после охлаждения гранул, позволяет лучше защищать субстрат от посторонних загрязнителей.

Это хорошая методика для домашнего использования.

Новая процедура, приведенная здесь, позволяет избежать трудностей старой методики при использовании концентрированной перекиси. В данной методике не требуется прогревание древесных гранул до добавления перекиси. Кроме того, вместе с перекисью возможно добавление в раствор ваших источников азота, извести или гипса.

Пропись рецепта «добавить и размешать»

1. Ополосните контейнер (применение кипящей воды не обязательно).

2. Отмерьте нужное количество извести, источника азота (см. в рецепте выше).

3. Отмерьте нужное количество субстрата в контейнер.

4. Отмерьте в отдельный контейнер воды (комнатной температуры) примерно

6 л. на 4,5 кг субстрата.

5. Добавьте к воде перекись до концентрации 0,45 %.

6. Если вы используете гранулы плохо размыкающие в воде, добавьте чайную ложку пищевой соды на 6 л. приготовленного раствора перекиси.

7. После добавления пищевой соды в перекись, залейте древесные гранулы раствором (добавив предварительно азотные добавки и т. д.)

8. Закройте крышку и позвольте гранулам намокнуть 10–15 мин.

9. Размешайте содержимое контейнера.

10. Дайте содержимому контейнера набухнуть в течение 2-х часов.

11. Еще раз перемешать субстрат. После перемешивания, по крайней мере, половина гранул должны развалиться на опилки.

12. Инокулируйте мицелий в субстрат и разложите по контейнерам.

Примечания к методу «добавить и размешать»

Для выращивания грибов лучше использовать древесные опилки, не содержащие смолистых веществ.

Вероятно, вам придется немного поэкспериментировать для подборки необходимого количества воды для вашего субстрата. Главное, чтобы субстрат после пропитки оставался влажным, но не сырым. Если вы используете малонамокаемый субстрат, можете добавить капельку моющего средства для лучшей смачиваемости субстрата.

Для приготовления раствора перекиси, лучше использовать концентрированную 30 % перекись (с соблюдением необходимых предосторожностей).

Подготовка «сырого» субстрата для использования с перекисью методом выпечки.

Еще один способ подготовки субстрата, содержащего разрушающие перекись ферменты, состоит в предварительной прожарке сырья в духовке. Так, например сырые опилки, хотя и содержат в своем составе разрушающие перекись ферменты, после пропаривания теряют способность разрушать перекись. Хотя метод пропарки субстрата может показаться сложным в исполнении из-за затрат электроэнергии и занятия места в духовке, упорного грибника эти трудности не остановят.

Процесс пропарки.

Вы должны определить для себя, параметры температуры и времени пропарки субстрата исходя из его вида. Вообще, если вы будете печь при температуре 150 градусов С в течение нескольких часов, то метод пропарки безусловно сработает.

Проверяйте, произошло ли разрушение ферментов.

1. Возьмите маленькое количество пропаренного субстрата и положите в чашку.

2. Добавьте к субстрату немного 3 % перекиси водорода, полностью покрыв субстрат.

3. Добавьте каплю моющего средства для лучшей смачиваемости субстрата.

Если в течение 15 минут отсутствует энергичное газовыделение — субстрат пассивен к перекиси.

Использование пропаренного субстрата.

Как только ваше основание будет пропарено и охлаждено, можете сохранить его для более позднего использования или использовать сейчас. Пробным путем подберите необходимое количество добавляемой воды для набухания субстрата до нужной степени влажности.

Могу предположить, что использованный вами материал, не гранулирован, и имеет пористость схожую с опилками (большинство гранулированных материалов в пропарке не нуждаются).

Вы можете использовать получившийся субстрат по рецепту «добавить и размешать», за исключением пункта — размешать набухшие гранулы. Вместо этого вы должны сделать:

1. Смешайте пропаренный субстрат с раствором перекиси.

2. Оставьте на некоторое время для стерилизации перекисью.

Если ваш субстрат — древесная стружка, процедура значительно упрощается. Достаточно пропитать стружку нужным количеством раствора для достижения приемлемой влажности.

Если перекись является для вас дефицитом, можете снизить его концентрацию в растворе. Субстрат потеряет основную часть загрязнений при пропарке.

1. Вычистите ваш контейнер и ополосните его.

2. Разделите приготовленную воду для пропитки пополам.

3. Добавьте нагретую до кипения половину воды к субстрату, смешанному с известью и источниками азота.

4. Добавьте ко второй половине воды перекись до концентрации 0,1 %.

5. Когда субстрат остынет, добавьте раствор перекиси и перемешайте.

6. После полного охлаждения, на субстрат можно прививать мицелий.

Методы культивации, описанные в этом приложении, показывают, что грибы можно культивировать на огромном количестве субстратов, применяя различные методики. Мне постоянно приходят в голову новые идеи культивации, которые я не могу в настоящий момент проверить. Я получаю большое количество корреспонденции от моих читателей, многие пишут мне о своих идеях выращивания. Надеюсь, данная книга стимулирует дальнейшие исследования в этой быстроразвивающейся области.